APLICAÇÃO DA TÉCNICA DE DGGE NA CARACTERIZAÇÃO DE COMUNIDADES DE ARCHAEA EM SOLOS DO CERRADO TOCANTINENSE

Ana Kleiber Pessoa Borges (UFT); Silvia Martins Salgado (UFT); Paula Benevides de Morais (UFT); Acácio Aparecido Navarrete (CENA); Siu Mui Tsai (CENA)

INTRODUÇÃO: A técnica de DGGE permite a separação de fragmentos de DNA com o mesmo tamanho, porém com seqüência de nucleotídeos diferentes, baseada na mobilidade eletroforética de uma molécula de DNA parcialmente desnaturada em géis de poliacrilamida com gradiente crescente de agente desnaturante. Este trabalho teve como objetivo avaliar a diversidade microbiológica de fungos, actinomicetos e outras bactérias do solo do Cerrado tocantinense na área do projeto JAVAES-URUBU, no município de Lagoa da Confusão, TO através da quantificação em meios seletivos, além de verificar a diversidade molecular do grupo Archaea por meio de extração do DNA genômico total do solo pela técnica de DGGE. MATERIAL E MÉTODOS: Amostras dos diferentes solos foram coletadas de 0 a 20 cm de profundidade nas áreas amostrais do projeto JAVAES-URUBU, município de Lagoa da Confusão, estado do Tocantins. Foi realizada extração de DNA genômico de microrganismos de 20 amostras de solo usando o kit Power Soil DNA Extraction (MO BIO, Carlsbad, CA) e quantificado em espectrofotômetro. A amplificação do gene 16S rRNA de Archaea por PCR  foram utilizando-se os iniciadores ARCH21f e ARCH958r  para amplificar uma região específica do gene de 16S rRNA de Archaea com aproximadamente 937 pares de base. As amplificações foram realizadas em termociclador modelo Gene Amp PCR System 9700 (Applied Biosystems). RESULTADOS E DISCUSSÃO: Os amplicons gerados a partir da PCR com os iniciadores ARCH21f e ARCH958r e ARCH340fGC e ARCH519r  foram separados por DGGE. Nas condições estabelecidas, foi possível obter perfis de comunidades de Archaea em solos naturais para 15 amostras de DNA extraídas diretamente dos solos sob os diferentes sistemas de uso da terra estudados. Os perfis gerados para as comunidades de Archaea quanto à avaliação comparativa das bandas evidenciou-se padrão de bandas característico para as comunidades de Archaea do solo presentes em solos sob cada sistema de uso da terra estudado.  CONCLUSÕES: O efeito antropogênico de desmatamento do Cerrado e uso do solo para agricultura na área do projeto JAVAES-URUBU, avaliado por meio da técnica de DGGE, evidenciou dissimilaridades entre as estruturas de comunidades de Archaea presentes nesses ambientes e aquelas encontradas sob solo de Cerrado “Stricto sensu” e áreas de plantio convencional de arroz, sugerindo que a conversão de áreas nativas para cultivadas altera a diversidade das comunidades de Archaea do solo.