25º Congresso Brasileiro de Microbiologia
ResumoID:2504-2


Área: Fermentação e Biotecnologia ( Divisão J )

PRODUÇÃO DA PROTEÍNA L1 DO PAPILOMAVÍRUS BOVINO TIPO 2 EM SISTEMA DE EXPRESSÃO RECOMBINANTE EXTRACELULAR BASEADO EM LEVEDURA PICHIA PASTORIS PARA FINS VACINAIS

Marcelo Nazário Cordeiro (UFPE); Filipe Colaço Mariz (UFPE); André Luiz Santos de Jesus (UFPE); Janaíne Cavalcanti Carvalho (UFPE); Antonio Carlos Freitas (UFPE)

Resumo

Os papilomavírus são vírus amplamente difundidos no mundo, infectando diversas espécies animais, inclusive o ser humano. São tipicamente epiteliotrópicos, cujo ciclo de infecção está vinculado ao ciclo celular. O vírus é estruturado numa cápsula protéica de 72  pentâmeros da proteína L1, e 12 cópias de uma segunda proteína, L2. Seu genoma é constituído por uma fita dupla de DNA circular, num total de aproximadamente 8 Kb. Além dos tipos virais que infectam o ser humano, como os principais responsáveis pelo câncer cervical em mulheres, tipos isolados de verrugas em bovinos foram descritos, e estão envolvidos em diversos processos carcinogênicos, sem tratamento validado. Uma estratégia vacinal baseada em VLP (virus-like particle) aproveita o agrupamento espontâneo da proteína de capsídeo L1, formando uma estrutura não-infectante, não oncogênica e imunogênica, oferecendo uma opção desejável no âmbito de prevenção.A proteção contra a infecção é conferida por anticorpos neutralizantes direcionados contra epitopos conformacionais da proteína estrutural L1 do capsídeo viral. Os objetivos deste trabalho foram a construção do plasmídeo pPICZalfaL1B2, obtido a partir da amplificação do gene, clonagem e seleção em sistema de Escherichia coli (linhagem DH5alfa), e expressão do gene L1 de BPV-2 (papilomavírus bovino tipo 2) em células da levedura metilotrófica Pichia pastoris (linhagem X-33). Com base neste sistema recombinante de expressão, por meio de eletroporação, foi possível a seleção e indução de clones para a produção da proteína L1 e sua recuperação a partir do sobrenadante.  O vetor pPICZalfa (Invitrogen) possibilita a expressão heteróloga por meio de indução do promotor AOX (promotor ativado para transcrição de genes relacionados ao metabolismo de metanol como única fonte de carbono), além de inserir à proteína recombinante o sinal de secreção α-mating e uma cauda de histidina, facilitando sua purificação e detecção. A clonagem foi confirmada por análise de restrição e sequênciamento; PCR das colônias de levedura identificaram clones com o plasmídeo integrado ao genoma; e análises em RT-PCR e dot-blotting, com anticorpos direcionados à cauda de histidina, indicaram a expressão. Uma vez otimizados os parâmetros de expressão do gene L1 do BPV-2 espera-se direcionar uma estratégia vacinal baseada em VLPs contra as papilomaviroses bovinas que pode ser extrapolado para papilomaviroses humanas, em especial o câncer de colo de útero.

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