PRODUÇÃO DE POLIHIDROXIALCANOATO CONTENDO MONÔMEROS DE CADEIA CURTA E MÉDIA POR LINHAGENS RECOMBINANTES DE PSEUDOMONAS PUTIDA ABRIGANDO GENE PHAC (PHA SINTASE) DE RALSTONIA EUTROPHA.

Lucas Waldvogel Cardoso (ICB/USP); José Gregório Cabrera Gomez (ICB/USP); Rogério de Souza Gomes (ICB/USP); Luiziana Ferreira da Silva (ICB/USP)

Polihidroxialcanoatos (PHA) são poliésteres acumulados por bactérias como material de reserva de carbono e energia. Esses polímeros despertam interesse industrial uma vez que apresentam propriedades termoplásticas. Poli-3-hidroxibutirato (P3HB) é o mais conhecido dos PHA, entretanto apresentam propriedades mecânicas que limitam sua aplicação na produção de filmes plásticos devido ao baixo alongamento para ruptura que apresentam. Pseudomonas produzem PHA contendo monômeros de cadeia média (HA_MCL) que são elastômeros. A incorporação de monômeros HA_MCL a um polímero contendo 3HB como principal constituinte permite aumentar seu alongamento para ruptura, possibilitando a produção de filmes plásticos. Neste trabalho, o gene phaC (PHA sintase) de Ralstonia eutropha, uma bactéria produtora de P3HB, foi amplificado utilizando técnica de PCR e clonado no vetor pGEM Teasy. O fragmento de DNA contendo o gene phaC foi transferido do vetor pGEM Teasy para o vetor de amplo espectro de hospedeiros pBBR1MCS-2 após digestão com a enzima de restrição EcoRI. O novo plasmídeo pBBR1MCS-2::phaC foi inserido em E. coli S17-1 pela técnica de transformação por choque térmico e posteriormente transferido para mutante de Pseudomonas putida deficiente no acúmulo de PHA por conjugação. A linhagem recombinante foi capaz de acumular cerca de 20% e 9% de PHA a partir de glicose e octanoato, respectivamente. O polímero produzido continha cerca de 92 mol% de unidades 3HB e o restante de unidades HA_MCL. Os resultados demonstram que P. putida é capaz de produzir monômeros 3HB independentemente da expressão de genes que levam a síntese de 3HB (phaA e phaB, respectivamente codificando b-cetotiolase e 3-cetoacil-CoA redutase NADPH dependente), além disso é capaz de produzir um copolímero de P3HB-co-HA_MCL tanto a partir de carboidratos como de ácidos graxos quando o gene de PHA sintase de R. eutropha é nela expresso.