COMPLEMENTAÇÃO HETERÓLOGA DA MOBILIZAÇÃO DE POLI-3-HIDROXIBUTIRATO EM MUTANTES DE BURKHOLDERIA SACCHARI PELO GENE PHAZA1 DE RALSTONIA EUTROPHA

Nuri Andrea Merchan Castellanos (USP); Luiziana Ferreira da Silva (USP); José Gregório Cabrera Gomez (USP)

Burkholderia sacchari é uma linhagem bacteriana isolada no Brasil de solo de canavial que tem sido estudada por sua capacidade de produzir polímeros biodegradáveis da família dos polihidroxialnoatos (PHA). Ao ser cultivada em sacarose sob limitação de um nutriente essencial como nitrogênio, B. sacchari acumula o homopolímero poli-3-hidroxibutirato (P3HB), que pode ser mobilizado para atender necessidades de fonte de carbono e/ou energia, sendo hidrolisado por PHB despolimerases intracelulares (PhaZ). Trabalhos anteriores sugerem que o sistema de mobilização de P3HB em B. sacchari pode ser constituído por duas oligômero hidrolases intracelulares e três ou quatro despolimerases intracelulares. Com base nas seqüências disponíveis dos genes que codificam para as PHB despolimerases intracelulares em R. eutropha, foram desenhados oligonucleotídeos específicos para a amplificação dos genes phaZa1, phaZa2 e phaZa3. Os fragmentos obtidos foram ligados ao vetor de expressão pBBR1MCS-2, transferidos por conjugação para E. coli S17-1 e realizado teste de complementação em mutantes LFM 398, 399 e 403 deficientes na mobilização de P3HB de B. saccchari obtidos por radiação UV. Os ensaios qualitativos em meio mineral sólido mostraram o gene phaZa1 foi capaz de complementar os mutantes restabelecendo o fenótipo selvagem, enquanto os mutantes que receberam os genes phaZa2 e phaZa3 continuaram apresentando deficiência na mobilização do P3HB. Ensaios em frascos agitados demonstraram que a linhagem selvagem é capaz de mobilizar 86% do P3HB acumulado, enquanto os mutantes LFM 398, 399 e 403 mobilizam entre 40 e 50% do P3HB acumulado. Os mutantes quando complementados com plasmídeo pBBR1MCS-2::phaZa1 mobilizam P3HB em quantidades semelhantes à linhagem selvagem. Os resultados sugerem que os mutantes de B. sacchari estão afetados em gene semelhante ao phaZa1 de R. eutropha.