25º Congresso Brasileiro de Microbiologia

25º Congresso Brasileiro de Microbiologia

ResumoID:2375-2

Área: Fermentação e Biotecnologia ( Divisão J )

PRODUÇÃO DA PROTEINA L1 DE HPV 16, 18 E 33 EM LEVEDURA PICHIA PASTORIS: BASE PARA O DESENVOLVIMENTO DE UMA VACINA PROFILÁTICA NACIONAL CONTRA O CÂNCER DE COLO DE ÚTERO

Eliane Campos Coimbra (UFPE); Helder Melo de Souza (UFPE); Maria Conceição Gomes Leitão (UFPE); Júlia Furtado Campos (UFPE); Janaíne Cavalcanti Carvalho (UFPE); André Luiz Santos de Jesus (UFPE); Antonio Carlos de Freitas (UFPE)

Resumo

A infecção pelos papilomavirus humanos (HPVs) é caracterizada como uma das principais DSTs que aflingem a população mundial e está diretamente relacionada com o desenvolvimento do câncer de colo de útero por HPVs de alto risco. No Brasil, o câncer de colo de útero produz uma média de 2,5 óbitos/100.000 indivíduos. Atualmente existem duas vacinas no mercado, aprovadas pela FDA, produzidas pela GSK e pela Merck & Co, baseadas em “Virus-Like Particles”, mas o alto custo (U$350.00) inviabiliza seu uso pelo SUS. Além disso, elas são efetivas somente contraos HPVs 16 e 18 , excluindo pelo menos 13 outros HPVs de alto risco. As VLPs de HPV são formadas a partir da proteína L1 de cada tipo viral, contra o qual confere forte imunidade humoral. A produção de VLPs é depende de sistema de expressão in vitro a partir de células modificadas geneticamente. O objetivo deste trabalho foi avaliar a possibilidade de expressaro gene L1 dos HPVs tipos 16,18 e 33 em células da levedura Pichia pastoris para a produção da proteína L1. Os genes L1 de cada tipo de HPV foram clonados no vetor de expressão pPICZA e seqüenciados para posterior integração destas construções no genoma da levedura através de eletroporação. Os clones foram induzidos à expressão e submetidos à extração de RNA total, seguida de RT-PCR, através da qual se detectou a transcrição de L1. A presença da proteína viral foi verificada por Dot Blot, com anticorpo específico anti-His, assim como, também foi utilizado o anti-L1 de HPV-16. Os resultados obtidos demonstram que o sistema de expressão baseado em P. pastoris é viável para produção de proteínas de HPV, porém, a análise de nossos resultados sugere que para obter maiores níveis de expressão é necessário aperfeiçoar o cultivo e/ou o gene L1 e desta forma estabelecer uma plataforma para a produção nacional de VLPs com fins vacinais.

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Apoio: CNPq, CAPES, FACEPE/PPSUS2008.

Palavras-chave: HPV, Pichia pastoris, CANCER DE COLO DE UTERO

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