ÿþ<HTML><HEAD><TITLE>25º Congresso Brasileiro de Microbiologia </TITLE><link rel=STYLESHEET type=text/css href=css.css></HEAD><BODY aLink=#ff0000 bgColor=#FFFFFF leftMargin=0 link=#000000 text=#000000 topMargin=0 vLink=#000000 marginheight=0 marginwidth=0><table align=center width=700 cellpadding=0 cellspacing=0><tr><td align=left bgcolor=#cccccc valign=top width=550><font face=arial size=2><strong><font face=Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif size=3><font size=1>25º Congresso Brasileiro de Microbiologia </font></font></strong><font face=Verdana size=1><b><br></b></font><font face=Verdana, Arial,Helvetica, sans-serif size=1><strong> </strong></font></font></td><td align=right bgcolor=#cccccc valign=top width=150><font face=arial size=2><strong><font face=Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif size=1><font size=1>ResumoID:2316-1</font></em></font></strong></font></td></tr><tr><td colspan=2><br><br><table align=center width=700><tr><td>Área: <b>Ecologia Microbiana ( Divisão I )</b><p align=justify><strong>APLICAÇAO DA TECNOLOGIA DE CROMATOGRAFIA DESNATURANTE DE ALTO DESEMPENHO (DHPLC) NO CONHECIMENTO DA DIVERSIDADE BACTERIANA ENDOFÍTICA DURANTE O PROCESSO INICIAL DE FERMENTAÇAO DA MANDIOCA (MANIHOT SP.)<BR></strong></p><p align=justify><b>Cintia Kodama </b> (<i>UFPA</i>); <b>Paulo Roberto Miranda </b> (<i>UFPA</i>); <b>Cinthia Bandeira </b> (<i>UFPA</i>); <b>Alberdan Santos </b> (<i>UFPA</i>); <b>Maria Paula Schneider </b> (<i>UFPA</i>); <b>Sara Cuadros Orellana </b> (<i>UFPA</i>); <b>Artur Silva </b> (<i>UFPA</i>)<br><br></p><b><font size=2>Resumo</font></b><p align=justify class=tres><font size=2> <style type="text/css"> <!-- @page { margin: 2cm } P { margin-bottom: 0.21cm } --> </style> <div style="text-align: justify;"> <font face="Arial, sans-serif">Neste trabalho, avaliou-se o uso da técnica de Denaturing High Performance Liquid Cromatography (DHPLC) para o estudo da diversidade microbiana durante a fermentaçao de mandioca (Manihot sp.). Raízes de mandioca previamente submetidas a assepsia superficial foram mantidas submersas em água destilada, na razão 1:2 m/v, por 7 dias a temperatura de 28ºC. A cada 12 horas, alíquotas do fermentado foram filtradas e congeladas em tampão NaCl 1M, Tris-Cl 1M e EDTA 100mM para preservação do DNA. O gene do 16S rRNA foi amplificado dessas amostras, usando os primers 8F e 1407R, e uma segunda reação de amplificação que cobria um fragmento de aproximadamente 194-pb da região V3 do 16S rRNA foi realizada com o objetivo de adicionar um grampo GC ao amplicon. A separação dos amplicons foi realizada por DHPLC, e as frações coletadas foram tratadas de duas maneiras. Na primeira, as amostras foram submetidas a uma nova amplificação para retirar os grampos GC antes de serem clonadas e sequenciadas. Na segunda estratégia, o produto de coleta foi clonado e sequenciado diretamente. Com a primeira abordagem, foram obtidas 132 sequencias, 45% das quais relacionam-se a bactérias ambientais, não cultiváveis e não classificadas em nenhum filo reconhecido. Na segunda abordagem, foram obtidas 193 seqüências cuja abundância relativa de filos calculada mostra a predominância de microorganismos pertencentes à famíia Proteobacteria (48%), além de bactérias não cultiváveis e não classificadas (40%) e bactérias do filo Firmicutes pertencentes à classe Clostridia (12%). O filo de maior predominância encontrado no decorrer do processo de fermentação da mandioca foi a das proteobactérias, e a família de maior abundância foi a Enterobacteriaceae. O segundo filo classificado de maior abundância foi o Firmicutes. Por outro lado, os filos Bacteroidetes e Actinobacteria não mostraram uma representação tão acentuada. Para o nosso conhecimento, esta é a primeira vez que essa abordagem é utilizada para o estudo da diversidade microbiana envolvida em um processo fermentativo. O DHPLC permitiu detectar uma vasta diversidade microbiana associada à fermentação da mandioca e mostrou ser um método pouco laborioso, rápido e eficaz, que representa uma alternativa interessante para a identificação e monitoramento de populações microbianas. </font></div><p style="text-indent: 1.01cm; margin-bottom: 0.49cm; line-height: 150%;" align="justify"> <style type="text/css"> <!-- @page { margin: 2cm } P { margin-bottom: 0.21cm } --> </style> </p><p style="text-indent: 1.01cm; margin-bottom: 0.49cm; line-height: 150%;" align="justify"> <font face="Arial, sans-serif">Apoio Financeiro: CNPq, FAPESPA, CAPES.</font></p> <p></p> </font></p><br><b>Palavras-chave: </b>&nbsp;DHPLC, diversidade microbiana, ecologia molecular, mandioca, fermentaçao</td></tr></table></tr></td></table></body></html>