| Área: Fermentação e Biotecnologia ( Divisão J ) CONSTRUÇÃO DE VETORES DE CLONAGEM PARA EXPRESSÃO DE TRANSPORTADORES DE PENTOSES EM S. CEREVISIAE VISANDO PRODUÇÃO DE ETANOL. Belisa Bordin de Sales (ICB II); Ana Raquel Souza Monteiro (ICB II); Elisabete José Vicente (ICB II)
ResumoNa tentativa de construção de linhagens de leveduras capazes de produzir etanol a partir de hidrolisados de cana-de-açúcar, onde as pentoses são os açúcares presentes em maior concentração, o transporte de pentoses (xilose e arabinose) para dentro da célula vem sendo extensamente estudado, sendo que vários autores concluíram que a captação do açúcar é a etapa limitante para a produção de etanol (Stephanopoulos, 2007). Uma vez que ainda não foi descoberto um sistema específico para o transporte ("uptake") de pentoses, acredita-se que a captação de xilose por leveduras seja mediada de forma não específica pelo sistema de transportadores de hexoses (Hamacher et al., 2002; Hahn-Hägerdal et al., 2007). 㰀倀㸀伀 漀戀樀攀琀椀瘀漀 搀攀猀琀攀 琀爀愀戀愀氀栀漀 愀 挀漀渀猀琀爀甀漀 搀攀 挀愀猀猀攀琀攀猀 搀攀 攀砀瀀爀攀猀猀漀 搀漀猀 最攀渀攀猀 㰀䔀䴀㸀䠀堀吀㔀㰀⼀䔀䴀㸀 攀 㰀䔀䴀㸀䠀堀吀㜀㰀⼀䔀䴀㸀Ⰰ 愀洀瀀氀椀昀椀挀愀搀漀猀 瀀漀爀 倀䌀刀 愀 瀀愀爀琀椀爀 搀漀 䐀一䄀 最攀渀洀椀挀漀 搀愀 氀椀渀栀愀最攀洀 搀攀 㰀䔀䴀㸀匀⸀挀攀爀攀瘀椀猀椀愀攀㰀⼀䔀䴀㸀 匀㈀㠀㠀䌀㬀 攀 愀 椀渀猀攀爀漀 搀攀 洀切氀琀椀瀀氀愀猀 挀瀀椀愀猀 搀攀猀琀攀猀 挀愀猀猀攀琀攀猀 搀攀 攀砀瀀爀攀猀猀漀 渀漀 最攀渀漀洀愀 搀攀 氀椀渀栀愀最攀渀猀 搀攀 㰀䔀䴀㸀匀⸀挀攀爀攀瘀椀猀椀愀攀㰀⼀䔀䴀㸀 攀洀瀀爀攀最愀搀愀猀 攀洀 甀猀椀渀愀 猀甀挀爀漀ⴀ愀氀挀漀漀氀攀椀爀愀猀⸀㰀⼀倀㸀
Neste momento, os genes HXT5 e HXT7 foram anplificados e inseridos, respectivamente, nos vetores comerciais pGEM-T (Vector Systems, Promega) e TOPO (Invitrogen). O sucesso da obtenção destas construções foi confirmado por análises de restrição e sequenciamentos. Na próxima etapa, os genes HXT5 e HXT7 serão clonados no vetor bifuncional pMA91, sob a regulação do promotor e do terminador de transcrição do gene PGK de S. cerevisiae. Em seguida, os fragmentos de DNA contendo os cassetes de expressão PGK-HXT5 e PGK-HXT7 serão purificados e inseridos no vetor pGEM-Teasy-d, previamente construído em nosso laboratório (Guerra et al., 2006). Isto permitirá a inserção de múltiplas cópias dos cassetes de expressão desejados no genoma de linhagens S. cerevisiae selvagens. 㰀倀㸀䄀倀伀䤀伀㨀 䌀䄀倀䔀匀㰀⼀倀㸀㰀⼀昀漀渀琀㸀㰀⼀瀀㸀㰀戀爀㸀㰀戀㸀倀愀氀愀瘀爀愀猀ⴀ挀栀愀瘀攀㨀 㰀⼀戀㸀☀渀戀猀瀀㬀吀爀愀渀猀瀀漀爀琀愀搀漀爀攀猀 搀攀 瀀攀渀琀漀猀攀猀Ⰰ 匀⸀ 挀攀爀攀瘀椀猀椀愀攀Ⰰ 攀琀愀渀漀氀㰀⼀琀搀㸀㰀⼀琀爀㸀㰀⼀琀愀戀氀攀㸀㰀⼀琀爀㸀㰀⼀琀搀㸀㰀⼀琀愀戀氀攀㸀㰀⼀戀漀搀礀㸀㰀⼀栀琀洀氀㸀
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