ÿþ<HTML><HEAD><TITLE>25º Congresso Brasileiro de Microbiologia </TITLE><link rel=STYLESHEET type=text/css href=css.css></HEAD><BODY aLink=#ff0000 bgColor=#FFFFFF leftMargin=0 link=#000000 text=#000000 topMargin=0 vLink=#000000 marginheight=0 marginwidth=0><table align=center width=700 cellpadding=0 cellspacing=0><tr><td align=left bgcolor=#cccccc valign=top width=550><font face=arial size=2><strong><font face=Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif size=3><font size=1>25º Congresso Brasileiro de Microbiologia </font></font></strong><font face=Verdana size=1><b><br></b></font><font face=Verdana, Arial,Helvetica, sans-serif size=1><strong> </strong></font></font></td><td align=right bgcolor=#cccccc valign=top width=150><font face=arial size=2><strong><font face=Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif size=1><font size=1>ResumoID:2263-1</font></em></font></strong></font></td></tr><tr><td colspan=2><br><br><table align=center width=700><tr><td>Área: <b>Genética e Biologia Molecular ( Divisão N )</b><p align=justify><strong>SELEÇÃO DE MUTANTES DE GLUCONACETOBACTER DIAZOTROPHICUS DEFECTIVOS NA SÍNTESE DE ÁCIDOS ORGÂNICOS </strong></p><p align=justify><b>Marcia Soares Vidal </b> (<i>Embrapa Agrobiologia</i>); <b>Cleiton de Paula Soares </b> (<i>UFRJ</i>); <b>Sandra Maria Andrade Fernandes </b> (<i>UNIG</i>); <b>Renata Jorge da Silva </b> (<i>UFRRJ</i>); <b><u>Kátia Regina dos Santos Teixeira </u></b> (<i>Embrapa Agrobiologia</i>)<br><br></p><b><font size=2>Resumo</font></b><p align=justify class=tres><font size=2> A capacidade de <span style="font-style: italic;">Gluconacetobacter&nbsp; diazotrophicus</span> produzir ácidos orgânicos (AOs), derivados da oxidação incompleta da glicose inclusive em condições de fixação de nitrogênio, representa uma das suas potenciais aplicações biotecnológicas; no entanto, para garantir a eficiência desses processos biológicos é necessário entender os mecanismos envolvidos e a influência de fatores externos sobre a regulação da expressão gênica em ambos processos. Diante disso, o presente trabalho buscou a geração e seleção de mutantes aleatórios de<span style="font-style: italic;"> G. diazotrophicus</span> com fenótipo alterado para a biossíntese de AOs. Três mil mutantes aleatórios gerados pela inserção do transposon Tn5 no DNA da estirpe selvagem PAL5<sup>T</sup> foram avaliados fenotipicamente em meio de cultivo P1 suplementado com glicose e ácido glicônico. Durante esta avaliação foram selecionados 24 mutantes cujo comportamento no meio seletivo mostrou-se alterado quando comparado com PAL5<sup>T</sup>, seja pela ausência de um halo característico para acidificação do meio, seja pela ausência de pigmentação indicando alterações na produção de ácidos glicônicos ou seus cetoderivados (os ácidos 2-cetoglicônico, 5-cetoglicônico ou 2,5-dicetoglicônico). Para comprovar o envolvimento da interrupção gênica com a produção de fenótipos alterados e sua relação com a produção de ácidos orgânicos foi realizada a identificação do sítio de inserção do Tn5 pelas metodologias de PCR invertido e sequenciamento. A caracterização de alguns mutantes revelou inserções em diversas regiões do genoma de <span style="font-style: italic;">G. diazotrophicus</span>, algumas delas não envolvidas diretamente no processo de fermentação oxidativa. Contudo, outros mutantes apresentaram inserções em genes envolvidos na cadeia respiratória e no metabolismo direto de glicose à ácido glicônico. Nos mutantes K314 e K416 a mutação ocorreu no gene da glicose desidrogenase com pirroloquinolina quinona, enzima chave no processo de transformação da glicose a ácido glicônico em <span style="font-style: italic;">Gluconobacter oxydans </span>e outros microrganismos. Em outros 5 mutantes a inserção ocorreu no gene que codifica uma subunidade da proteína NADH:quinone redutase, enzima associada a membrana de <span style="font-style: italic;">G. diazotrophicus</span> e envolvida na cadeia de respiração dessa bactéria. Estudos relacionados a capacidade de produção do ácido glicônico e de seus cetoderivados pelos mutantes indicarão o envolvimento dessas proteínas neste processo em <span style="font-style: italic;">G. diazotrophicus</span>. <br>Fontes financiadoras: Embrapa- MP3 Processo No. 03.06.09.013.00; Pronex-FAPERj Processo No. E.26/171.523/2006; CNPq/Processo No: 552820/2007-5 </font></p><br><b>Palavras-chave: </b>&nbsp;Gluconacetobacter diazotrophicus, Transposon, mutação, seleção de mutantes, alteração de fenótipo</td></tr></table></tr></td></table></body></html>