A ADERÊNCIA A CÉLULAS HEP-2 INDUZ FILAMENTAÇÃO EM CEPAS DE ESCHERICHIA COLI DEFICIENTES EM EXONUCLEASE III 

Suelen Bozzi Costa (UERJ); Ana Claudia Machado Pereira (UERJ); Ana Carolina C Campos (UERJ); Juliana Rodrigues Alves (UERJ); Ana Luiza Mattos-guaraldi (UERJ); Raphael Hirata Júnior (UERJ); Ana Claudia de Paula Rosa (UERJ); Lídia Maria Buarque de Oliveira Asad (UERJ)

O reparo por excisão de bases (BER) é responsável por reparar danos oxidativos no DNA causados por espécies reativas de oxigênio (ERO) que podem ser geradas durante o metabolismo celular normal, além de serem geradas pelo hospedeiro na resposta imunológica. As ERO, ao reagir com o DNA, podem causar uma variedade de danos que podem resultar em mutações do genoma. O objetivo deste trabalho foi avaliar a influência de BER na filamentação observada em cepas de Escherichia coli K-12 quando aderidas às células HEp-2 e o papel do oxigênio no crescimento filamentoso. Os mutantes deficientes em BER utilizados neste estudo são derivados de E. coli K-12. As bactérias foram cultivadas sob condições de aerobiose e anaerobiose por 18h e posteriormente, foram realizados testes de aderência com a linhagem celular HEp-2 (ATCC-CCL23). Os mutantes foram inoculados sobre o tapete celular e submetidos à co-incubação por 3 horas a 37^oC. Para manter a condição de anaerobiose, tioglicolato 0,5% foi adicionado ao meio durante todo o período de infecção. As lamínulas foram dispostas sobre lâmina de vidro e observadas em microscópio ótico. No teste de aderência com HEp-2, foi observado que as cepas apresentaram numerosos filamentos, sendo que o mutante xthA e o triplo mutante xth, nfo e nth foram os que apresentaram maior número de filamentos por campo, mesmo quando o teste foi realizado sob condições de anaerobiose. Além disto, a complementação desses mutantes com o gene xth através da transformação plasmidial diminuiu a filamentação sugerindo um papel importante da exonuclease III, codificada pelo gene xth, no reparo de certos tipos de danos no DNA que levam a indução da filamentação. O aumento da filamentação nos mutantes BER observado no teste de aderência com HEp-2 pode ser induzido por uma via independente de oxigênio e estar associado com a mutação do gene xth.