25º Congresso Brasileiro de Microbiologia

25º Congresso Brasileiro de Microbiologia

ResumoID:2064-1

Área: Genética e Biologia Molecular ( Divisão N )

ESTUDO DE UM CLUSTER GENÉTICO DE CAULOBACTER CRESCENTUS ENVOLVIDO NA RESPOSTA A ESTRESSE POR CÁTIONS DIVALENTES

Estela Ynés Valencia Morante (PPIB); Vania Braz (ICB); Marilis Del Valle Marques (ICB)

Resumo

਀㰀倀猀琀礀氀攀㴀∀吀䔀堀吀ⴀ䄀䰀䤀䜀一㨀樀甀猀琀椀昀礀㬀䰀䤀一䔀ⴀ䠀䔀䤀䜀䠀吀㨀㄀㔀　─㬀䴀䄀刀䜀䤀一㨀　挀洀　挀洀　瀀琀∀ 挀氀愀猀猀㴀䴀猀漀一漀爀洀愀氀㸀㰀䤀猀琀礀氀攀㴀∀洀猀漀ⴀ戀椀搀椀ⴀ昀漀渀琀ⴀ猀琀礀氀攀㨀渀漀爀洀愀氀∀㸀㰀匀倀䄀一猀琀礀氀攀㴀∀䰀䤀一䔀ⴀ䠀䔀䤀䜀䠀吀㨀㄀㔀　─㬀䘀伀一吀ⴀ䘀䄀䴀䤀䰀夀㨀 ✀䄀爀椀愀氀✀Ⰰ✀猀愀渀猀ⴀ猀攀爀椀昀✀㬀䌀伀䰀伀刀㨀戀氀愀挀欀㬀䘀伀一吀ⴀ匀䤀娀䔀㨀㄀㄀瀀琀∀㸀䌀愀甀氀漀戀愀挀琀攀爀挀爀攀猀挀攀渀琀甀猀㰀⼀匀倀䄀一㸀㰀⼀䤀㸀㰀匀倀䄀一猀琀礀氀攀㴀∀䰀䤀一䔀ⴀ䠀䔀䤀䜀䠀吀㨀㄀㔀　─㬀䘀伀一吀ⴀ䘀䄀䴀䤀䰀夀㨀 ✀䄀爀椀愀氀✀Ⰰ✀猀愀渀猀ⴀ猀攀爀椀昀✀㬀䌀伀䰀伀刀㨀戀氀愀挀欀㬀䘀伀一吀ⴀ匀䤀娀䔀㨀㄀㄀瀀琀∀㸀  甀洀愀愀氀昀愀瀀爀漀琀攀漀戀愀挀琀爀椀愀漀氀椀最漀琀爀昀椀挀愀搀攀瘀椀搀愀氀椀瘀爀攀攀砀瀀漀猀琀愀愀瘀愀爀椀愀攀猀渀愀猀挀漀渀挀攀渀琀爀愀攀猀搀漀猀挀漀洀瀀漀猀琀漀猀渀漀愀洀戀椀攀渀琀攀㰀匀倀䄀一猀琀礀氀攀㴀∀洀猀漀ⴀ戀椀搀椀ⴀ昀漀渀琀ⴀ眀攀椀最栀琀㨀戀漀氀搀∀㸀⸀ 䄀瘀愀爀爀攀搀甀爀愀搀攀甀洀愀戀椀戀氀椀漀琀攀挀愀搀攀洀甀琀愀渀琀攀猀挀漀渀猀琀爀甀搀愀瀀攀氀愀椀渀猀攀爀漀愀氀攀愀琀爀椀愀搀漀琀爀愀渀猀瀀漀猀漀渀洀椀渀椀ⴀ㰀⼀匀倀䄀一㸀㰀⼀匀倀䄀一㸀㰀匀倀䄀一猀琀礀氀攀㴀∀䰀䤀一䔀ⴀ䠀䔀䤀䜀䠀吀㨀㄀㔀　─㬀䘀伀一吀ⴀ䘀䄀䴀䤀䰀夀㨀 ✀吀椀洀攀猀一攀眀刀漀洀愀渀倀匀䴀吀✀Ⰰ✀猀愀渀猀ⴀ猀攀爀椀昀✀㬀䌀伀䰀伀刀㨀戀氀愀挀欀㬀䘀伀一吀ⴀ匀䤀娀䔀㨀㄀㄀瀀琀㬀洀猀漀ⴀ戀椀搀椀ⴀ昀漀渀琀ⴀ昀愀洀椀氀礀㨀吀椀洀攀猀一攀眀刀漀洀愀渀倀匀䴀吀∀㸀吀渀㔀䬀㈀㰀䤀猀琀礀氀攀㴀∀洀猀漀ⴀ戀椀搀椀ⴀ昀漀渀琀ⴀ猀琀礀氀攀㨀渀漀爀洀愀氀∀㸀氀愀挀娀㰀⼀䤀㸀昀漀爀愀洀椀猀漀氀愀搀漀猀搀漀椀猀洀甀琀愀渀琀攀猀猀攀渀猀瘀攀椀猀愀䌀搀㰀⼀匀倀䄀一㸀㰀匀唀倀㸀㰀匀倀䄀一猀琀礀氀攀㴀∀䰀䤀一䔀ⴀ䠀䔀䤀䜀䠀吀㨀㄀㔀　─㬀䘀伀一吀ⴀ䘀䄀䴀䤀䰀夀㨀 ✀吀椀洀攀猀一攀眀刀漀洀愀渀倀匀䴀吀✀Ⰰ✀猀愀渀猀ⴀ猀攀爀椀昀✀㬀䘀伀一吀ⴀ匀䤀娀䔀㨀㄀㄀瀀琀㬀洀猀漀ⴀ戀椀搀椀ⴀ昀漀渀琀ⴀ昀愀洀椀氀礀㨀吀椀洀攀猀一攀眀刀漀洀愀渀倀匀䴀吀∀㸀㈀⬀㰀⼀匀倀䄀一㸀㰀⼀匀唀倀㸀㰀匀倀䄀一猀琀礀氀攀㴀∀䰀䤀一䔀ⴀ䠀䔀䤀䜀䠀吀㨀㄀㔀　─㬀䘀伀一吀ⴀ䘀䄀䴀䤀䰀夀㨀 ✀吀椀洀攀猀一攀眀刀漀洀愀渀倀匀䴀吀✀Ⰰ✀猀愀渀猀ⴀ猀攀爀椀昀✀㬀䌀伀䰀伀刀㨀戀氀愀挀欀㬀䘀伀一吀ⴀ匀䤀娀䔀㨀㄀㄀瀀琀㬀洀猀漀ⴀ戀椀搀椀ⴀ昀漀渀琀ⴀ昀愀洀椀氀礀㨀吀椀洀攀猀一攀眀刀漀洀愀渀倀匀䴀吀∀㸀攀娀渀㰀⼀匀倀䄀一㸀㰀匀唀倀㸀㰀匀倀䄀一猀琀礀氀攀㴀∀䰀䤀一䔀ⴀ䠀䔀䤀䜀䠀吀㨀㄀㔀　─㬀䘀伀一吀ⴀ䘀䄀䴀䤀䰀夀㨀 ✀吀椀洀攀猀一攀眀刀漀洀愀渀倀匀䴀吀✀Ⰰ✀猀愀渀猀ⴀ猀攀爀椀昀✀㬀䘀伀一吀ⴀ匀䤀娀䔀㨀㄀㄀瀀琀㬀洀猀漀ⴀ戀椀搀椀ⴀ昀漀渀琀ⴀ昀愀洀椀氀礀㨀吀椀洀攀猀一攀眀刀漀洀愀渀倀匀䴀吀∀㸀㈀⬀㰀⼀匀倀䄀一㸀㰀⼀匀唀倀㸀㰀匀倀䄀一猀琀礀氀攀㴀∀䰀䤀一䔀ⴀ䠀䔀䤀䜀䠀吀㨀㄀㔀　─㬀䘀伀一吀ⴀ䘀䄀䴀䤀䰀夀㨀 ✀吀椀洀攀猀一攀眀刀漀洀愀渀倀匀䴀吀✀Ⰰ✀猀愀渀猀ⴀ猀攀爀椀昀✀㬀䌀伀䰀伀刀㨀戀氀愀挀欀㬀䘀伀一吀ⴀ匀䤀娀䔀㨀㄀㄀瀀琀㬀洀猀漀ⴀ戀椀搀椀ⴀ昀漀渀琀ⴀ昀愀洀椀氀礀㨀吀椀洀攀猀一攀眀刀漀洀愀渀倀匀䴀吀∀㸀Ⰰ 洀甀琀愀搀漀猀渀漀猀最攀渀攀猀䌀䌀㄀㘀㌀㘀攀䌀䌀㄀㘀㐀　⸀ 䔀猀琀攀琀爀愀戀愀氀栀漀琀攀洀瀀漀爀漀戀樀攀琀椀瘀漀愀瘀愀氀椀愀爀漀瀀愀瀀攀氀搀漀挀氀甀猀琀攀爀搀攀最攀渀攀猀䌀䌀㄀㘀㌀㐀愀䌀䌀㄀㘀㐀　搀攀㰀⼀匀倀䄀一㸀㰀䤀猀琀礀氀攀㴀∀洀猀漀ⴀ戀椀搀椀ⴀ昀漀渀琀ⴀ猀琀礀氀攀㨀渀漀爀洀愀氀∀㸀㰀匀倀䄀一猀琀礀氀攀㴀∀䰀䤀一䔀ⴀ䠀䔀䤀䜀䠀吀㨀㄀㔀　─㬀䘀伀一吀ⴀ䘀䄀䴀䤀䰀夀㨀 ✀䄀爀椀愀氀✀Ⰰ✀猀愀渀猀ⴀ猀攀爀椀昀✀㬀䌀伀䰀伀刀㨀戀氀愀挀欀㬀䘀伀一吀ⴀ匀䤀娀䔀㨀㄀㄀瀀琀∀㸀䌀愀甀氀漀戀愀挀琀攀爀挀爀攀猀挀攀渀琀甀猀㰀⼀匀倀䄀一㸀㰀⼀䤀㸀㰀匀倀䄀一猀琀礀氀攀㴀∀䰀䤀一䔀ⴀ䠀䔀䤀䜀䠀吀㨀㄀㔀　─㬀䘀伀一吀ⴀ䘀䄀䴀䤀䰀夀㨀 ✀䄀爀椀愀氀✀Ⰰ✀猀愀渀猀ⴀ猀攀爀椀昀✀㬀䌀伀䰀伀刀㨀戀氀愀挀欀㬀䘀伀一吀ⴀ匀䤀娀䔀㨀㄀㄀瀀琀∀㸀㰀⼀匀倀䄀一㸀㰀匀倀䄀一猀琀礀氀攀㴀∀䰀䤀一䔀ⴀ䠀䔀䤀䜀䠀吀㨀㄀㔀　─㬀䘀伀一吀ⴀ䘀䄀䴀䤀䰀夀㨀 ✀吀椀洀攀猀一攀眀刀漀洀愀渀倀匀䴀吀✀Ⰰ✀猀愀渀猀ⴀ猀攀爀椀昀✀㬀䌀伀䰀伀刀㨀戀氀愀挀欀㬀䘀伀一吀ⴀ匀䤀娀䔀㨀㄀㄀瀀琀㬀洀猀漀ⴀ戀椀搀椀ⴀ昀漀渀琀ⴀ昀愀洀椀氀礀㨀吀椀洀攀猀一攀眀刀漀洀愀渀倀匀䴀吀∀㸀渀愀爀攀猀瀀漀猀琀愀愀洀攀琀愀椀猀⸀ 伀猀最攀渀攀猀䌀䌀㄀㘀㌀㔀Ⰰ 䌀䌀㄀㘀㌀㘀Ⰰ 䌀䌀㄀㘀㌀㜀挀漀搀椀昀椀挀愀洀瀀爀漀琀攀渀愀猀栀椀瀀漀琀琀椀挀愀猀挀漀渀猀攀爀瘀愀搀愀猀Ⰰ 漀猀最攀渀攀猀䌀䌀㄀㘀㌀㐀攀䌀䌀㄀㘀㌀㠀搀甀愀猀瀀爀漀瘀瘀攀椀猀㰀⼀匀倀䄀一㸀㰀匀倀䄀一猀琀礀氀攀㴀∀䰀䤀一䔀ⴀ䠀䔀䤀䜀䠀吀㨀㄀㔀　─㬀䘀伀一吀ⴀ䘀䄀䴀䤀䰀夀㨀 ✀䄀爀椀愀氀✀Ⰰ✀猀愀渀猀ⴀ猀攀爀椀昀✀㬀䌀伀䰀伀刀㨀戀氀愀挀欀㬀䘀伀一吀ⴀ匀䤀娀䔀㨀㄀㄀瀀琀∀㸀漀砀椀搀漀爀攀搀甀琀愀猀攀猀㰀⼀匀倀䄀一㸀㰀匀倀䄀一猀琀礀氀攀㴀∀䰀䤀一䔀ⴀ䠀䔀䤀䜀䠀吀㨀㄀㔀　─㬀䘀伀一吀ⴀ䘀䄀䴀䤀䰀夀㨀 ✀吀椀洀攀猀一攀眀刀漀洀愀渀倀匀䴀吀✀Ⰰ✀猀愀渀猀ⴀ猀攀爀椀昀✀㬀䌀伀䰀伀刀㨀戀氀愀挀欀㬀䘀伀一吀ⴀ匀䤀娀䔀㨀㄀㄀瀀琀㬀洀猀漀ⴀ戀椀搀椀ⴀ昀漀渀琀ⴀ昀愀洀椀氀礀㨀吀椀洀攀猀一攀眀刀漀洀愀渀倀匀䴀吀∀㸀挀漀洀搀漀洀渀椀漀䜀䴀䌀Ⰰ 漀最攀渀攀䌀䌀㄀㘀㐀　甀洀爀攀最甀氀愀搀漀爀㰀⼀匀倀䄀一㸀㰀匀倀䄀一猀琀礀氀攀㴀∀䰀䤀一䔀ⴀ䠀䔀䤀䜀䠀吀㨀㄀㔀　─㬀䘀伀一吀ⴀ䘀䄀䴀䤀䰀夀㨀 ✀吀椀洀攀猀一攀眀刀漀洀愀渀倀匀䴀吀✀Ⰰ✀猀愀渀猀ⴀ猀攀爀椀昀✀㬀䘀伀一吀ⴀ匀䤀娀䔀㨀㄀㄀瀀琀㬀洀猀漀ⴀ戀椀搀椀ⴀ昀漀渀琀ⴀ昀愀洀椀氀礀㨀吀椀洀攀猀一攀眀刀漀洀愀渀倀匀䴀吀∀㸀搀攀琀爀愀渀猀挀爀椀漀攀漀最攀渀攀䌀䌀㄀㘀㌀㤀挀漀搀椀昀椀挀愀甀洀愀瀀爀漀琀攀渀愀琀爀愀渀猀洀攀洀戀爀愀渀愀挀漀洀甀洀搀漀洀渀椀漀猀攀渀猀漀爀攀砀琀爀愀挀椀琀漀瀀氀愀猀洀琀椀挀漀攀甀洀搀漀洀渀椀漀瀀攀瀀琀椀搀愀猀攀挀椀琀漀瀀氀愀猀洀琀椀挀漀焀甀攀瀀攀爀琀攀渀挀攀㰀匀倀䄀一猀琀礀氀攀㴀∀洀猀漀ⴀ猀瀀愀挀攀爀甀渀㨀礀攀猀∀㸀☀渀戀猀瀀㬀㰀⼀匀倀䄀一㸀愀挀氀愀猀猀攀搀愀猀洀攀琀愀氀漀瀀爀漀琀攀愀猀攀猀 ⠀䠀䔀堀堀䠀⤀ 焀甀攀氀椀最愀洀娀渀㰀匀唀倀㸀㈀⬀㰀⼀匀唀倀㸀㰀⼀匀倀䄀一㸀㰀匀倀䄀一猀琀礀氀攀㴀∀䰀䤀一䔀ⴀ䠀䔀䤀䜀䠀吀㨀㄀㔀　─㬀䘀伀一吀ⴀ䘀䄀䴀䤀䰀夀㨀 ✀䄀爀椀愀氀✀Ⰰ✀猀愀渀猀ⴀ猀攀爀椀昀✀㬀䘀伀一吀ⴀ匀䤀娀䔀㨀㄀㄀瀀琀∀㸀⸀ 㰀⼀匀倀䄀一㸀㰀匀倀䄀一猀琀礀氀攀㴀∀䰀䤀一䔀ⴀ䠀䔀䤀䜀䠀吀㨀㄀㔀　─㬀䘀伀一吀ⴀ䘀䄀䴀䤀䰀夀㨀 ✀吀椀洀攀猀一攀眀刀漀洀愀渀倀匀䴀吀✀Ⰰ✀猀愀渀猀ⴀ猀攀爀椀昀✀㬀䌀伀䰀伀刀㨀戀氀愀挀欀㬀䘀伀一吀ⴀ匀䤀娀䔀㨀㄀㄀瀀琀㬀洀猀漀ⴀ戀椀搀椀ⴀ昀漀渀琀ⴀ昀愀洀椀氀礀㨀吀椀洀攀猀一攀眀刀漀洀愀渀倀匀䴀吀∀㸀㰀㼀砀洀氀㨀渀愀洀攀猀瀀愀挀攀瀀爀攀昀椀砀㴀漀渀猀㴀 ∀甀爀渀㨀猀挀栀攀洀愀猀ⴀ洀椀挀爀漀猀漀昀琀ⴀ挀漀洀㨀漀昀昀椀挀攀㨀漀昀昀椀挀攀∀ ⼀㸀㰀漀㨀瀀㸀㰀⼀漀㨀瀀㸀㰀⼀匀倀䄀一㸀㰀⼀倀㸀

Os promotores dos genes CC1634, CC1636, CC1638 e CC1640 foram clonados a montante do gene repórter lacZ com a finalidade de determinar em quais condições estes genes apresentavam-se mais expressos. Os ensaios de atividade de B-Galactosidase indicaram que o gene CC1638 não possui promotor próprio, embora sua região codificadora encontre-se a uma distäncia de 174 pb do operon contendo os genes CC1639 e CC1640. Ensaios de RT-PCR confirmaram que os genes CC1637, CC1638, C1639 e CC1640 encontram-se num único transcrito constituindo, portanto, um operon. De maneira similar, os genes CC1634 e CC1635 foram testados através de RT-PCR e mostraram-se co-transcritos, enquanto que o transcrito de CC1636 é monocistrônico. Ensaios de atividade de B-Galactosidase indicaram que a expressão dos operons é aumentada na presença de ditiotreitol, mas não de H₂O₂. Além disso, o operon CC1634-35 mostra-se mais expresso na presença de cádmio (CdCl₂) e reprimido na presença de cobre (CuCl₂). A região codificando o domínio endometalopeptidase do gene CC1639 foi clonada no vetor de expressão pProEXHta e introduzida em E. coli DH5a. O peptídio foi purificado a partir de corpos de inclusão para posteriores ensaios de proteólise in vitro do putativo repressor CC1640.

਀㰀倀猀琀礀氀攀㴀∀吀䔀堀吀ⴀ䄀䰀䤀䜀一㨀樀甀猀琀椀昀礀㬀䰀䤀一䔀ⴀ䠀䔀䤀䜀䠀吀㨀㄀㔀　─㬀䴀䄀刀䜀䤀一㨀　挀洀　挀洀　瀀琀∀ 挀氀愀猀猀㴀䴀猀漀一漀爀洀愀氀㸀㰀䈀猀琀礀氀攀㴀∀洀猀漀ⴀ戀椀搀椀ⴀ昀漀渀琀ⴀ眀攀椀最栀琀㨀渀漀爀洀愀氀∀㸀㰀匀倀䄀一猀琀礀氀攀㴀∀䰀䤀一䔀ⴀ䠀䔀䤀䜀䠀吀㨀㄀㔀　─㬀䘀伀一吀ⴀ䘀䄀䴀䤀䰀夀㨀 ✀䄀爀椀愀氀✀Ⰰ✀猀愀渀猀ⴀ猀攀爀椀昀✀㬀䘀伀一吀ⴀ匀䤀娀䔀㨀㄀㄀瀀琀∀㸀䄀瀀漀椀漀䘀椀渀愀渀挀攀椀爀漀㨀䌀一倀焀㰀⼀匀倀䄀一㸀㰀⼀䈀㸀㰀匀倀䄀一猀琀礀氀攀㴀∀䰀䤀一䔀ⴀ䠀䔀䤀䜀䠀吀㨀㄀㔀　─㬀䘀伀一吀ⴀ䘀䄀䴀䤀䰀夀㨀 ✀䄀爀椀愀氀✀Ⰰ✀猀愀渀猀ⴀ猀攀爀椀昀✀㬀䘀伀一吀ⴀ匀䤀娀䔀㨀㄀㄀瀀琀∀㸀㰀䈀猀琀礀氀攀㴀∀洀猀漀ⴀ戀椀搀椀ⴀ昀漀渀琀ⴀ眀攀椀最栀琀㨀渀漀爀洀愀氀∀㸀攀䘀䄀倀䔀匀倀㰀⼀䈀㸀㰀漀㨀瀀㸀㰀⼀漀㨀瀀㸀㰀⼀匀倀䄀一㸀㰀⼀倀㸀

Palavras-chave: Caulobacter crescentus, Expressão gênica, Estresse a metais

਀�