25º Congresso Brasileiro de Microbiologia

25º Congresso Brasileiro de Microbiologia

ResumoID:2062-1

Área: Micobacteriologa ( Divisão C )

DETECÇÃO DAS MUTAÇÕES RELACIONADAS COM A RESISTÊNCIA À RIFAMPICINA E ISONIAZIDA EM ISOLADOS DE MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS UTILIZANDO MICROPLACAS

Raquel de Abreu Maschmann (UFRGS); Sérgio Ferreira Junior (FEPPS/CDCT); Márcia Susana Nunes Silva (FEPPS/CDCT); Arnaldo Zaha (UFRGS); Maria Lucia Rosa Rossetti (FEPPS/CDCT)

Resumo

O aumento da incidência da tuberculose está trazendo sérias consequências à saúde pública. Devido ao recente aumento de resistência aos fármacos utilizados no tratamento, se faz necessária a realização de testes de suscetibilidade aos fármacos em todos os isolados de M. tuberculosis.

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Foi padronizado um PCR multiplex que amplifica regiões dos genes rpoB, katG e inhA, que estão relacionadas com a resistência, juntamente com o elemento de inserção IS6110. Foram desenhadas 15 sondas. Uma para detecção do complexo M. tuberculosis complementar a sequência interna do IS6110, 10 sondas para detectar os genótipos mais frequentes do gene rpoB, cinco com a sequência selvagem e cinco com as mutações mais frequentes, duas sondas do gene katG, uma com genótipo selvagem e outra com a mutação no códon 315 (AGC-ACC) e duas sondas do gene inhA, uma com genótipo selvagem e outra com a mutação na posição -15(C-T). As sondas foram fixadas na microplaca e hibridizadas em fase líquida com os produtos de PCR biotinilados, sendo detectada através da adição do conjugado enzimático estreptavidina-peroxidase, e a reação positiva foi obtida pela adição do seu substrato. O resultado positivo foi visualizado pela reação de cor e quantificado em espectrofotômetro. A caracterização de sensibilidade ou resistência da bactéria foi obtida através do padrão de hibridização da microplaca. O resultado obtido pelo método desenvolvido foi comparado com o sequenciamento.

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Intituíção de fomento: CNPq, FEPPS

Palavras-chave: mycobacterium, resistência, rifampicina, isoniazida, microplaca

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