ÿþ<HTML><HEAD><TITLE>25º Congresso Brasileiro de Microbiologia </TITLE><link rel=STYLESHEET type=text/css href=css.css></HEAD><BODY aLink=#ff0000 bgColor=#FFFFFF leftMargin=0 link=#000000 text=#000000 topMargin=0 vLink=#000000 marginheight=0 marginwidth=0><table align=center width=700 cellpadding=0 cellspacing=0><tr><td align=left bgcolor=#cccccc valign=top width=550><font face=arial size=2><strong><font face=Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif size=3><font size=1>25º Congresso Brasileiro de Microbiologia </font></font></strong><font face=Verdana size=1><b><br></b></font><font face=Verdana, Arial,Helvetica, sans-serif size=1><strong> </strong></font></font></td><td align=right bgcolor=#cccccc valign=top width=150><font face=arial size=2><strong><font face=Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif size=1><font size=1>ResumoID:2004-1</font></em></font></strong></font></td></tr><tr><td colspan=2><br><br><table align=center width=700><tr><td>Área: <b>Micobacteriologa ( Divisão C )</b><p align=justify><strong> IDENTIFICAÇÃO E DELEÇÃO DE UMA REGIÃO DO DNA DO MICOBACTERIÓFAGO D29 PARA INSERÇÃO DE GENES QUE EXPRESSÃO PROTEÍNAS FLUORESCENTES PELA TÉCNICA DE RECOMBINAÇÃO EM BACTERIÓFAGOS POR ELETROPORAÇÃO DE DNA </strong></p><p align=justify><b><u>Joas Lucas da Silva </u></b> (<i>USP</i>); <b>Mariana Piuri </b> (<i>UNIV. PITT</i>); <b>Artemir Coelho Brito Brito </b> (<i>USP</i>); <b>Gisele Medeiros Bastos </b> (<i>USP</i>); <b>Walkiria Souza </b> (<i>USP</i>); <b>Graham Hatfull </b> (<i>UNIV. PITT</i>); <b>Rosario Dominguez Crespo Hirata </b> (<i>USP</i>); <b>Mario Hiroyuki Hirata </b> (<i>USP</i>)<br><br></p><b><font size=2>Resumo</font></b><p align=justify class=tres><font size=2> O Brasil está entre os países mais afetados pela tuberculose no mundo. O longo período de tratamento, a seleção de bactérias resistentes a falta de testes diagnósticos rápidos e de baixo custo tem dificultado o controle da doença nos países em desenvolvimento. O objetivo deste trabalho foi identificar e deletar uma região do micobateriofago D29 pela técnica recém descrita de recombinação em bacteriófagos por eletroporação de DNA (BRED) e observar se esta deleção não afeta a produção de bacteriófagos funcionais necessários para o desenvolvimento de fagos expressando proteínas fluorescentes. O genoma do micobacteriófago D29 apresenta dois genes, localizados na porção final do braço direito, parcialmente deletados. Esta região foi selecionada para deleção de aproximadamente 1kpB. Um fragmento de 100 pb(F1) homólogo a região de interesse foi sintetisado e primers de 25pb com caldas de 75pb também homólogas a região foram utilizados para amplificar F1. O produto de 200pb gerado foi eletroporado com o DNA do D29 em 100 ul de células de <span style="font-style: italic;">M. smegmatis </span>mc<sup>2</sup> 155:pJV53. O plasmídeo pJV53 expressa dois genes do fago Che9 responsáveis pela indução da recombinação. Após eletroporação, 900ul de 7H9/ 1mM CaCl<sub>2&nbsp; </sub>foram adicionados e o meio incubado por 1h/37<sup>o</sup> C/250rpm. 9ml de meio contendo 4,5 ml de 7H9; 4,5ml de agar semi solido MBTA e 1mM CaCl<sub>2 </sub>foram adicionados e o volume final colocado sobre placas de Petri de 150mm contendo agar 7H10 previamente aquecidas a 37<sup>o </sup>C. As placas foram incubadas por 24h para formação dos halos de inibição.&nbsp; Bacteriófagos mutantes foram identificados por PCR a partir de amostras colhidas dos halos de inibição e diluidas em tampão de de bacteriófago. D29 mutantes não apresentaram alterações quando comparados com o micobacteriófago selvagem. Estes dados sugerem que a inserção de genes nesta região não afeta a expressão de genes essenciais e pode ser utilizada para o desenvolvimento de testes rápidos e de baixo custo para detecção de <span style="font-style: italic;">M. tuberculosis </span>em&nbsp; escarro<br><br><span style="font-weight: bold;"><span style="font-style: italic;"><span style="text-decoration: underline;"></span></span></span><hr style="width: 100%; height: 2px;"><span style="font-weight: bold;"><span style="font-style: italic;"><span style="text-decoration: underline;"></span></span></span><sup> <br></sup>1&nbsp; </font></p><br><b>Palavras-chave: </b>&nbsp;Bacteriófagos, tuberculose, diagnóstico</td></tr></table></tr></td></table></body></html>