25º Congresso Brasileiro de Microbiologia
ResumoID:1969-1


Área: Fermentação e Biotecnologia ( Divisão J )

ISOLAMENTO E IDENTIFICAÇÃO MOLECULAR DE BACTÉRIAS UREOLÍTICAS DE SOLO PROVENIENTE DE SÃO PAULO ENVOLVIDAS EM FENÔMENOS DE BIOCALCIFICAÇÃO

Ana Carla Thomaz dos Santos (FATEC); Maria Alba Cincotto (POLI-USP); Priscila Ikeda Ushimaru (I.O-USP); Vivian Pellizari (I.O-USP); Vanderley Moacyr John (POLI-USP); Márcia Aiko Shirakawa (POLI-USP)

Resumo

A biocalcificação é um fenômeno que envolve o metabolismo de microrganismos na produção de carbonato de cálcio (CaCO3). Este processo tem sido aplicado na conservação e restauro de patrimônio histórico, proteção de materiais de construção e bioconsolidação de solos. A via ureolítica com produção de CO2 e NH3 e precipitação de CaCO3 em meio com íons Ca2+ tem incentivado a busca por linhagens bacterianas mais eficientes. Com o objetivo de isolar bactérias ureolíticas capazes de precipitar CaCO3 foram realizadas inoculações sucessivas de 3 amostras de solo coletados em São Paulo, SP. Cinco repiques sucessivos na proporção de 1:10 foram inoculados no meio de cultura YE+U (extrato de levedura 20gL-1 e ureia 20gL-1). A confirmação da atividade ureolítica foi realizada pela alcalinização do meio com solução indicadora de fenolftaleina. O DNA total de 2 isolados foi extraido e o gene para rRNA 16S amplificado através de primers universais 27F e 1401R. Os fragmentos amplificados de 1500 bp foram purificados e sequenciados. As sequências nucleotídicas foram editadas pelo programa BioEdit. As sequências referências foram obtidas do banco de dados Ribossomal Database Project II. As bactérias apresentaram similaridade com os gêneros Bacillus sp. e Sporosarcina sp. Para a avaliação da bioprecipitação de CaCO3 dos dois isolados foi utilizado o meio de cultura CaCl2+U (cloreto de cálcio 50gL-1 + ureia 20gL-1). Os inóculos foram preparados a partir de uma cultura pura de 24 hs em meio YE+U em uma proporção 1:10 (inóculo:CaCl2+U) a 28ºC. Os cristais de CaCO3 foram analisados por difração de raios-x (DRX), microscopia eletrônica de varredura (MEV) e termogravimetria. A DRX mostrou que ambos os isolados produziram calcita. O estudo dos cristais realizado por MEV mostrou que o representante do gênero Bacillus sp. (I-001) apresentou placas sobrepostas de CaCO3 e o do gênero Sporosarcina sp. (I-002) obteve cristais de CaCO3 envoltos por uma matriz orgânica. Nos dois casos as bactérias serviram como sítio de nucleação na cristalização. As análises termogravimétricas indicaram que o isolado I-001 (Bacillus sp.) teve maior concentração de CaCO3 que Sporosarcina sp. (I-002). Membros destes gêneros apresentam reconhecida atividade ureolítica com precipitação de CaCO3. Ambos os isolados apresentam potencial biotecnológico que será avaliado em etapa subsequente.

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