ÿþ<HTML><HEAD><TITLE>25º Congresso Brasileiro de Microbiologia </TITLE><link rel=STYLESHEET type=text/css href=css.css></HEAD><BODY aLink=#ff0000 bgColor=#FFFFFF leftMargin=0 link=#000000 text=#000000 topMargin=0 vLink=#000000 marginheight=0 marginwidth=0><table align=center width=700 cellpadding=0 cellspacing=0><tr><td align=left bgcolor=#cccccc valign=top width=550><font face=arial size=2><strong><font face=Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif size=3><font size=1>25º Congresso Brasileiro de Microbiologia </font></font></strong><font face=Verdana size=1><b><br></b></font><font face=Verdana, Arial,Helvetica, sans-serif size=1><strong> </strong></font></font></td><td align=right bgcolor=#cccccc valign=top width=150><font face=arial size=2><strong><font face=Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif size=1><font size=1>ResumoID:1963-1</font></em></font></strong></font></td></tr><tr><td colspan=2><br><br><table align=center width=700><tr><td>Área: <b>Genética e Biologia Molecular ( Divisão N )</b><p align=justify><strong>ANÁLISE REGULATÓRIA DAS PROTEÍNAS PII NO METABOLISMO DE NITROGÊNIO DA BACTÉRIA DIAZOTRÓFICA <SPAN STYLE="FONT-STYLE: ITALIC;">AZOSPIRILLUM&NBSP; AMAZONENSE</SPAN></strong></p><p align=justify><b>Débora Broch Trentini </b> (<i>UFRGS</i>); <b>Fernando Hayashi Sant'anna </b> (<i>UFRGS</i>); <b>Irene Silveira Schrank </b> (<i>UFRGS</i>)<br><br></p><b><font size=2>Resumo</font></b><p align=justify class=tres><font size=2> <i style="">Azospirillum </i>compreende um grupo de microrganismos diazotróficos de vida livre capazes de se associar de forma benéfica com gramíneas economicamente importantes, como cana-de-açúcar e arroz. Em associação, promovem o crescimento vegetal por diversos mecanismos, como produção de fitohormônios, indução da absorção de nutrientes pelas raízes e fixação biológica do nitrogênio. A espécie <i style="">Azospirillum amazonense</i> se destaca das demais pela tolerância a pHs ácidos e pela capacidade de fixar N na presença de amônia. A fim de estudar o sistema de regulação da fixação e do metabolismo de N de <i style="">A. amazonense</i>, o presente trabalho propõe caracterizar funcionalmente as proteínas de transdução de sinal PII desta bactéria. Proteínas PII são moléculas sinalizadoras dos níveis celulares de N que atuam pela ligação direta a diversos efetores celulares, como enzimas, transportadores e fatores transcricionais. A indicação da falta de N se dá pela uridilação das proteínas PII pela enzima GlnD. Dois genes parálogos para proteínas PII foram isolados em <i style="">A. amazonense</i> e classificados como do tipo GlnB e GlnK. Experimentos de RT-PCR demonstraram que ambos genes apresentaram expressão aumentada quando <i style="">A. amazonense</i> foi mantido em meio desprovido de fonte de N. Essa regulação provavelmente se deve à ativação de promotores &#963;<sup>54</sup> associados ao fator transcricional NtrC, cujos sítios de reconhecimento foram mapeados nas regiões regulatórias de ambos os genes. Com o objetivo de investigar os alvos celulares das proteínas PII, estão sendo realizados experimentos de <i style="">pull-down</i> das formas ativas (uridiladas) e inativas de PII contra extratos de <i style="">A. amazonense</i> cultivado em condições de limitação e abundância de N, respectivamente. Para tal, as proteínas GlnB e GlnK de <i style="">A. amazonense</i>, bem como a enzima GlnD de <i style="">A. brasilense</i>, foram expressas em <i style="">Escherichia coli</i> BL21 (DE3) fusionadas à cauda de histidina e purificadas em resina de afinidade por níquel. A enzima GlnD será usada para a uridilação <i style="">in vitro</i> das proteínas PII. A padronização do experimento de <i style="">pull-down</i> está sendo realizada com a proteína GlnB contra o extrato protéico de <i style="">A. amazonense</i> referente a condição de abundância de N. As prováveis proteínas de interação obtidas foram separadas por SDS-PAGE e analisadas por LC-MS/MS em um instrumento ESI-QUAD-TOF. Até o momento, apenas uma proteína hipotética foi identificada. <p></p> </font></p><br><b>Palavras-chave: </b>&nbsp;pii, azospirillum, nitrogênio, pull-down, espectrometria</td></tr></table></tr></td></table></body></html>