PROSPECÇÃO DE GENES RELACIONADOS A MANUTENÇÃO DA INTEGRIDADE GENÔMICA.

Rita de Cássia Barreto da Silva (UFRN); Uaska Bezerra E Silva (UFRN); Delanne Cristina Souza de Sena (UFRN); Lucymara Fasarella Agnez Lima (UFRN)

É estimado que apenas cerca de 1% da diversidade microbiana pode ser cultivado em laboratório, apresentando-se, portanto, como um enorme pool biológico e genético inexplorado. Estudos confirmam a abordagem metagenômica como uma estratégia valiosa para encontrar novos genes biotecnologicamente relevantes. Entretanto, sua aplicação em busca de genes relacionados a manutenção da integridade genômica, conta apenas com poucos relatos. Os microrganismos estão constantemente expostos a agentes estressores que acabam por demandar e selecionar mecanismos de proteção e/ou correção apropriados a potenciais danos. O estudo das funções de proteção ao estresse celular, além de implicações moleculares e evolutivas, também tem importantes implicações médicas. Diante disso, estratégias de metagenoma e seleção funcional foram utilizadas em busca de clones expressando genes relacionados ao reparo de DNA e/ou resistência ao estresse oxidativo. Bibliotecas metagenômicas foram obtidas utilizando DNA ambiental, obtido a partir de amostras de solo coletadas em diferentes biomas do Rio Grande do Norte, fragmentação aleatória e clonagem em vetor pBC. A análise funcional foi realizada utilizando meio sólido suplementado com H₂O₂. Ensaios para confirmação da atividade estão sendo realizados através de complementação funcional e curvas de sobrevivência, utilizando cepas deficientes em diferentes enzimas de reparo de DNA. A análise das seqüências dos clones selecionados utilizando o programa BlastX indica a presença de proteínas hipotéticas, proteína fosfocarreadora Hpr e Ribose-5-fosfato isomerase. Dados de seqüenciamento se relacionam com a função testada, salientando o sucesso da abordagem metagenômica combinada com métodos de seleção funcional, sendo indicativo de resultados promissores.