FORMAÇÃO DE BIOFILME EM ESCHERICHIA COLI ENTEROPATOGÊNICA ATÍPICA ATRAVÉS DA CONTAGEM DE UNIDADES FORMADORAS DE COLÔNIAS E MICROSCOPIA CONFOCAL DE FLUORESCÊNCIA.

Hebert Fabrício Culler (L Bact / IButantan); Cristiane Moda Mota (L Bact / IButantan); Cecilia Mari Abe (L Bact / IButantan); Marcelo Palma Sircili (L Bact / IButantan); Marcia Regina Franzolin (L Bact / IButantan)

As Escherichia coli enteropatogênicas atípicas (EPECa) ultimamente tornaram-se os agentes bacterianos mais comuns como causa de diarréia infantil. A adesão em células epiteliais formando microcolônias é um passo inicial na formação de biofilme. Biofilmes microbianos são comunidades complexas de microrganismos aderidos à superfícies bióticas e abióticas envoltas por uma matriz de exopolissacarídeos e são associados à persistência bacteriana e à resistência a antimicrobianos. O objetivo deste estudo foi verificar a capacidade de formação de biofilme de 6 amostras de EPEC atípicas isoladas de caso de diarréia, em superfícies abióticas (poliestireno e vidro) e celulares (células epiteliais HEp-2 pré-fixadas), em placas de 24 poços. Foram avaliadas uma amostra de cada padrão de adesão à células HEp-2: não aderente - NA, localizada-like - LAL, difusa - DA, padrão indefinido - IND, localizada - LA e agregativa - AA, através do ensaio de contagem de UFC/cm² aderidas às superfícies, utilizando Triton X-100, sendo realizadas as diluições seriadas e o plaqueamento em Ágar Luria-Bertani, em períodos de 24 horas, 6, 12 e 18 dias de incubação a 37^o.C. As placas (de 6 a 18 dias) foram coradas e analisadas por microscopia confocal de fluorescência. Nos dois tipos de superfícies avaliadas e nos diversos períodos, não houve diferença significativa de formação de biofilme, mantendo-se entre 10⁶ e 10⁸ UFC/cm², sendo a amostra AA a que formou maior quantidade. Verificou-se que de 24h para os outros períodos de incubação houve diferença significativa de formação de biofilme, enquanto que não apresentou diferença entre 6 a 18 dias. Como o ensaio de UFC/cm² mensura apenas as bactérias viáveis, essas mantiveram-se em nível similar provavelmente pelo fato das colonizadoras iniciais tornaram-se inviáveis nesse período. Verificou-se no aumento de 1000X apenas o desenvolvimento de microcolônias na amostra com padrão LA. As amostras LAL, DA, IND e AA apresentaram biofilmes mais espessos, com característica semelhante a biofilme maduro, enquanto que a amostra NA apresentou apenas adesão à lamínula e algumas bactérias aglomeradas após 12 dias. O ensaio de UFC/cm² deve ser empregado juntamente com ferramenta qualitativa tal como a microscopia confocal de fluorescência que permita visualizar estruturas de biofilmes. A adesão e formação de biofilme por EPEC atípica após longo período de incubação podem favorecer os casos de diarréia persistentes, usufruindo das vantagens da resistência bacteriana à ação de antimicrobianos.