ÿþ<HTML><HEAD><TITLE>25º Congresso Brasileiro de Microbiologia </TITLE><link rel=STYLESHEET type=text/css href=css.css></HEAD><BODY aLink=#ff0000 bgColor=#FFFFFF leftMargin=0 link=#000000 text=#000000 topMargin=0 vLink=#000000 marginheight=0 marginwidth=0><table align=center width=700 cellpadding=0 cellspacing=0><tr><td align=left bgcolor=#cccccc valign=top width=550><font face=arial size=2><strong><font face=Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif size=3><font size=1>25º Congresso Brasileiro de Microbiologia </font></font></strong><font face=Verdana size=1><b><br></b></font><font face=Verdana, Arial,Helvetica, sans-serif size=1><strong> </strong></font></font></td><td align=right bgcolor=#cccccc valign=top width=150><font face=arial size=2><strong><font face=Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif size=1><font size=1>ResumoID:1903-1</font></em></font></strong></font></td></tr><tr><td colspan=2><br><br><table align=center width=700><tr><td>Área: <b>Genética e Biologia Molecular ( Divisão N )</b><p align=justify><strong> COMPARAÇÃO DE MÉTODOS DE SOLUBILIZAÇÃO DE PROTEÍNAS PARA ANÁLISE PROTEÔMICA DE <SPAN STYLE="FONT-STYLE: ITALIC;">CRYPTOCOCCUS GATTII</SPAN> </strong></p><p align=justify><b><u>Juliana Ferraz de Correa </u></b> (<i>UFRGS</i>); <b>Marilene Henning Vainstein </b> (<i>UFRGS</i>)<br><br></p><b><font size=2>Resumo</font></b><p align=justify class=tres><font size=2> <span style="font-style: italic;">Cryptococcus gattii</span> é uma levedura basidiomicética que apresenta uma cápsuila polissacarídica, a qual esta relacionada à sua patogenicidade. Essa espécie é um dos agentes etiológicos da criptococose, uma doença sistêmica que pode resultar em óbito. A utilização de técnicas proteômicas para identificação de proteínas envolvidas na interação patógeno-hospedeiro apresenta-se como uma importante ferramenta para a compreensão dos mecanismos envolvidos na infecção. No presente estudo, diferentes métodos de extração/solubilização de proteínas de <span style="font-style: italic;">C. gattii</span> estão sendo avaliados quanto a sua eficiência na resolução das proteínas totais para utilização em eletroforese bidimensional. Após cultivo em caldo Sabouraud a 37°C, as células foram lavadas, liofilizadas e submetidas à extração das proteínas com diferentes métodos de extração/solubilização. Método 1: Extração por maceração com N<font size="1">2</font> e solubilização em tampão contendo 50mM Tris-HCl pH 7,5; 1mM EDTA; 50uM TPCK; 1mM PMSF; 5mM iodacetamida, método 2: método 1 com acréscimo de 2% de CHAPS no tampão de solubilização, método 3: método 1 com uso de sonicação (3 pulsos de 30 segundos - 20Hz) após o passo de solubilização. As proteínas foram quantificadas pelo método de Bradford e visualizadas por eletroforese em SDS-PAGE. As condições para a eletroforese bidimensional foram padronizadas sendo ótimas utilizando-se 1,2mg de proteínas totais em tiras de 17cm com faixa de pH de 4-7. Os géis de poliacrilamida foram corados com Comassie G250 e analisados qualitativamente com o software PDQuest Basic 8.0 (Bio-Rad). Foram obtidos 12 mg de proteínas totais no método 1, 16mg no método 2 (30% a mais que no método 1), e 22mg no método 3 (80% a mais que no método 1 e 40% a mais que no método 2). Nas análises preliminares dos géis bidimensionais, apesar de obter-se uma quantidade maior de proteínas no método 3, o método 2 apresentou uma melhor resolução das proteínas em relação aos métodos 1 e 3. Ainda, houve um maior número de spots de proteínas ácidas no método 2, as quais geralmente apresentam difícil solubilização e resolução. Posteriormente, algumas proteínas serão selecionadas para identificação por espectrometria de massas utilizando o programa Mascot e o banco de dados de <span style="font-style: italic;">Cryptococcus neoformans </span>(H99) do <span style="font-style: italic;">Broad Institute</span> a fim de se testar a qualidade e compatibilidade de cada método.<br><br> </font></p><br><b>Palavras-chave: </b>&nbsp;CHAPS, Cryptococcus gattii, método de solubilização, proteômica, sonicação</td></tr></table></tr></td></table></body></html>