| Área: Micobacteriologa ( Divisão C ) DETECÇÃO DA RESISTENCIA À ISONIAZIDA E RIFAMPICINA COM A UTILIZAÇÃO DA PCR EM TEMPO REAL (RT-PCR) EM CEPAS DE MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS
Rosangela Siqueira Oliveira (IAL); Maria Gisele Gonçalves (IAL); Lucila Okauyama Fukasawa (IAL); Maristela Marques Salgado (IAL); Lee H Harrison (Univ Pittsburgh); Claudio Tavares Sacchi (IAL)
ResumoA resistência às drogas anti-tuberculose (TB) e é atualmente a ameaça mais importante que compromete o controle mundial da TB. Atualmente os programas governamentais de controle da TB (PCT) estabelecem tratamentos padronizados. O tratamento consiste em uma associação de drogas em que a Rifampicina (RIF) e a Isoniazida (INH) são as principais drogas utilizadas. O teste de sensibilidade a drogas (TSA) é uma ferramenta recomendada pelo PCT para avaliar a resistência do M. tuberculosis (Mt) frente aos fármacos, detectar falência de tratamento e monitorar a resistência primária e/ou adquirida. Os métodos de TSA são trabalhosos e demorados, levando em média cerca de 7 a 30 dias para a obtenção de resultados. Assim, é necessário o desenvolvimento de métodos mais rápidos para a detecção de resistência de Mt. 㰀倀 挀氀愀猀猀㴀䴀猀漀一漀爀洀愀氀 猀琀礀氀攀㴀∀䴀䄀刀䜀䤀一㨀 挀洀 挀洀 瀀琀㬀 吀䔀堀吀ⴀ䄀䰀䤀䜀一㨀 樀甀猀琀椀昀礀∀㸀㰀匀倀䄀一 猀琀礀氀攀㴀∀䘀伀一吀ⴀ匀䤀娀䔀㨀 瀀琀㬀 䘀伀一吀ⴀ䘀䄀䴀䤀䰀夀㨀 䄀爀椀愀氀∀㸀㰀䘀伀一吀 昀愀挀攀㴀∀吀椀洀攀猀 一攀眀 刀漀洀愀渀Ⰰ 吀椀洀攀猀Ⰰ 猀攀爀椀昀∀㸀伀 漀戀樀攀琀椀瘀漀 搀攀猀琀攀 琀爀愀戀愀氀栀漀 瘀愀氀椀搀愀爀 愀 琀挀渀椀挀愀 搀愀 倀䌀刀 攀洀 吀攀洀瀀漀ⴀ刀攀愀氀 ⠀刀吀ⴀ倀䌀刀⤀ 瀀愀爀愀 愀 搀攀琀攀挀漀 爀瀀椀搀愀 搀愀 爀攀猀椀猀琀渀挀椀愀 搀攀 䴀琀 愀 䤀一䠀 攀 刀䤀䘀⸀ 䄀 爀攀猀椀猀琀渀挀椀愀 攀⼀漀甀 猀攀渀猀椀戀椀氀椀搀愀搀攀 愀 䤀一䠀 攀 刀䤀䘀 搀攀 㤀㤀 挀攀瀀愀猀 搀攀 䴀琀 昀漀椀 愀渀愀氀椀猀愀搀愀 猀椀洀甀氀琀愀渀攀愀洀攀渀琀攀 瀀攀氀漀 洀琀漀搀漀 愀甀琀漀洀愀琀椀稀愀搀漀 搀攀 䴀䜀䤀吀 㤀㘀 攀 瀀攀氀愀 琀挀渀椀挀愀 刀吀ⴀ倀䌀刀 渀漀 䤀渀猀琀椀琀甀琀漀 䄀搀漀氀昀漀 䰀甀琀稀 搀攀 匀漀 倀愀甀氀漀⸀㰀漀㨀瀀㸀㰀⼀漀㨀瀀㸀㰀⼀䘀伀一吀㸀㰀⼀匀倀䄀一㸀㰀⼀倀㸀
Para a detecção de resistência por RT-PCR a INH foram utilizadas sondas específicas para o códon 315 do gene katG e para a resistência a RIF sondas para um fragmento do gene rpoB. 㰀倀 挀氀愀猀猀㴀䴀猀漀一漀爀洀愀氀 猀琀礀氀攀㴀∀䴀䄀刀䜀䤀一㨀 挀洀 挀洀 瀀琀㬀 吀䔀堀吀ⴀ䄀䰀䤀䜀一㨀 樀甀猀琀椀昀礀∀㸀㰀匀倀䄀一 猀琀礀氀攀㴀∀䘀伀一吀ⴀ匀䤀娀䔀㨀 瀀琀㬀 䘀伀一吀ⴀ䘀䄀䴀䤀䰀夀㨀 䄀爀椀愀氀∀㸀㰀䘀伀一吀 昀愀挀攀㴀∀吀椀洀攀猀 一攀眀 刀漀洀愀渀Ⰰ 吀椀洀攀猀Ⰰ 猀攀爀椀昀∀㸀吀漀搀愀猀 愀猀 挀攀瀀愀猀 焀甀攀 愀瀀爀攀猀攀渀琀愀爀愀洀 爀攀猀椀猀琀渀挀椀愀 愀 䤀一䠀 攀 刀䤀䘀 攀洀 甀洀 搀漀猀 洀琀漀搀漀猀 攀 ─ 搀愀猀 猀攀渀猀瘀攀椀猀 昀漀爀愀洀 猀攀焀ﰀ攀渀挀椀愀搀漀猀 漀猀 昀爀愀最洀攀渀琀漀猀 搀攀 椀渀琀攀爀攀猀猀攀 搀漀猀 最攀渀攀猀 㰀䤀 猀琀礀氀攀㴀∀洀猀漀ⴀ戀椀搀椀ⴀ昀漀渀琀ⴀ猀琀礀氀攀㨀 渀漀爀洀愀氀∀㸀欀愀琀䜀㰀⼀䤀㸀 攀 㰀䤀 猀琀礀氀攀㴀∀洀猀漀ⴀ戀椀搀椀ⴀ昀漀渀琀ⴀ猀琀礀氀攀㨀 渀漀爀洀愀氀∀㸀爀瀀漀䈀㰀⼀䤀㸀⸀㰀漀㨀瀀㸀㰀⼀漀㨀瀀㸀㰀⼀䘀伀一吀㸀㰀⼀匀倀䄀一㸀㰀⼀倀㸀
Resultados parciais revelam 100% de especificidade e sensibilidade de 56% e 97% para INH e RIF, respectivamente. Para INH a sensibilidade passou a ser de 73% quando sonda específica para o gene inhA foi adicionada ao teste. Ao analisar seqüências dos fragmentos dos genes katG e rpoB já realizadas, observamos que 30% a 40% das cepas fenotipicamente resistentes à INH e RIF também apresentaram mutações no gene inhA ou em outros pontos do gene rpoB. 㰀倀 挀氀愀猀猀㴀䴀猀漀一漀爀洀愀氀 猀琀礀氀攀㴀∀䴀䄀刀䜀䤀一㨀 挀洀 挀洀 瀀琀㬀 吀䔀堀吀ⴀ䄀䰀䤀䜀一㨀 樀甀猀琀椀昀礀∀㸀㰀匀倀䄀一 猀琀礀氀攀㴀∀䘀伀一吀ⴀ匀䤀娀䔀㨀 瀀琀㬀 䘀伀一吀ⴀ䘀䄀䴀䤀䰀夀㨀 䄀爀椀愀氀∀㸀㰀䘀伀一吀 昀愀挀攀㴀∀吀椀洀攀猀 一攀眀 刀漀洀愀渀Ⰰ 吀椀洀攀猀Ⰰ 猀攀爀椀昀∀㸀䔀猀琀攀猀 搀愀搀漀猀 爀攀瘀攀氀愀洀 焀甀攀 愀 琀挀渀椀挀愀 搀攀 刀吀ⴀ倀䌀刀 瀀爀漀洀椀猀猀漀爀愀 瀀愀爀愀 搀攀琀攀挀漀 搀攀 爀攀猀椀猀琀渀挀椀愀 愀 䤀一䠀 攀 刀䤀䘀 瀀漀搀攀渀搀漀 挀漀渀琀爀椀戀甀椀爀 瀀愀爀愀 愀 漀琀椀洀椀稀愀漀 搀漀 琀爀愀琀愀洀攀渀琀漀 搀愀 琀甀戀攀爀挀甀氀漀猀攀⸀㰀漀㨀瀀㸀㰀⼀漀㨀瀀㸀㰀⼀䘀伀一吀㸀㰀⼀匀倀䄀一㸀㰀⼀倀㸀
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