DESENVOLVIMENTO DE SISTEMA RFLP-PCR PARA IDENTIFICAÇÃO DAS PRINCIPAIS ESPÉCIES DE CANDIDA ENVOLVIDAS EM QUADROS INFECCIOSOS DE CANDIDÍASE

Adriana Sotero-martins (FIOCRUZ); Hugo Valério Corrêa de Oliveira (UFAM); Ormezinda Celeste Cristo Fernandes (FIOCRUZ); Elvira Carvajal (UERJ); Checrala Oliveira Furtado da Silva (UERJ); Renata Corrêa Heinen (FIOCRUZ)

A candidíase é uma das mais freqüentes infecções microbiológicas. As leveduras do gênero Candida: C. albicans, C. tropicalis, C. glabrata, C. krusei, C. parapsilosis, C. kefyr, C. guilliermondii e C. lusitanae são os agentes etiológicos mais freqüentes desta infecção, sendo C. albicans a responsável majoritária. Em geral, na rotina laboratorial hospitalar, o diagnóstico da candidíase se dá apenas pela confirmação de estruturas fúngicas, por exame direto, e sua validação pela observação do crescimento em cultura. A identificação por métodos moleculares tem sido alvo de estudos que visam uma identificação rápida e precisa, o desenvolvimento de sistemas RFLP-PCR baseados na região ITS (internal transcribed spacer) tem se mostrado promissor no screening inicial das principais espécies envolvidas nos quadros infecciosos de Candidíase, permitindo a identificação a nível de gênero e fácil distinção entre as espécies. Neste trabalho foi desenvolvido um Sistema Multiplex PCR com o uso de oligonucleotídeos universais ITS. Após verificação das seqüências depositadas no GeneBank para as regiões do rDNA (ITS1-5.8S-ITS2) das seis principais espécies envolvidas no quadro infeccioso da candidíase vulvovaginal e oral: C. albicans (CA); C. tropicalis (CT); C. glabrata (CG); C. parapisilosis (CP); C. krusei (CK) e C. dubliniensis (CD). Foram estabelecidos os padrões de tamanhos dos amplicons das seqüências de ITS1-5.8S-ITS2 para as seis espécies. Os perfis RFLP-PCR neste sistema multiplex produz fragmentos de tamanhos específicos, possibilitando a diferenciação das espécies pelo perfil de fragmentos gerados. Desta forma, após a amplificação simultânea com os quatro pares de oligos que se formaram no sistema desenvolvido, foi possível observar o perfil RFLP dos amplicons em gel de poliacrilamida 6 %. O sistema tem sido utilizado com sucesso no screening inicial das cepas de Candida nos projetos desenvolvidos pelo grupo. Esta sendo aprimorado o processo com o uso de enzimas de restrição interespecíficas.