25º Congresso Brasileiro de Microbiologia

25º Congresso Brasileiro de Microbiologia

ResumoID:1828-1

Área: Genética e Biologia Molecular ( Divisão N )

ANÁLISE DA LOCALIZAÇÃO SUBCELULAR DE PROTEÍNAS DE CANDIDA ALBICANS FUSIONADAS COM GFP APÓS TRANSPOSIÇÃO IN VITRO

Marcos Vinicios Salles Dias (FMRP- USP); Carol Kobori Fonseca (FMRP- USP); Paulo Sérgio Rodrigues Coelho (FMRP- USP)

Resumo

Uma das análises funcionais de novos genes consiste na determinação da localização subcelular da proteína codificada. Neste trabalho descrevemos a utilização de dois transposons artificiais derivados do transposon bacteriano Tn5 que incorporam a sequência codificadora de GFP (green fluorescent protein) para gerar fusões em proteínas ainda não caracterizadas no fungo oportunista Candida albicans. Os transposons utilizados também contêm os marcadores URA3 e Kan^r para seleção de leveduras e bactérias, respectivamente. Após a transposição in vitro, os alelos contendo as inserções podem ser transferidos para o lócus cromossômico por recombinação homóloga.

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O segundo transposon testado CaTn5GFP-SAT1-FLP, pode gerar fusões com GFP truncadas na região C-terminal do gene alvo. Utilizamos como alvo uma mini-biblioteca de 20 genes não caracterizados em C. albicans cujos homólogos em S. cerevisiae estão envolvidos na organização do citoesqueleto de actina. Obtivemos uma inserção in-frame no gene VRP1. A análise da fluorescência da proteína de fusão VRP1-GFP tanto em leveduras quanto em hifas de C. albicans mostra uma distribuição similar ao citoesqueleto cortical de actina com alguns pontos de co-localização.

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Palavras-chave: Candida albicans, GFP, Localização subcelular

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