AVALIAÇÃO DA EXPRESSÃO GÊNICA DO DERMATÓFITO TRICHOPHYTON RUBRUM DURANTE O CULTIVO EM QUERATINA COMO ÚNICA FONTE DE NUTRIENTE.

Rodrigo Cazzaniga (USP); Henrique Silveira (USP); Márcia Maria Marques (USP); Pablo Sanches (USP); Geraldo Passos (USP); Antonio Rossi (USP); Nilce Maria Martinez-rossi (USP)

Trichophyton rubrum é um dermatófito cosmopolita e apresenta a maior prevalência em isolados clínicos. Este fungo possui a habilidade de infectar tecidos queratinizados como unhas, cabelos e pele, utilizando estes substratos como principal fonte de carbono. O crescimento e a manutenção de T. rubrum neste ambiente estão correlacionados com o monitoramento e a manutenção do pH ambiente pelo fungo, favorecendo assim a atuação de algumas de suas proteases secretadas.  O conhecimento dos mecanismos envolvidos nestes processos é fundamental para o entendimento das respostas adaptativas de T. rubrum durante sua interação com o hospedeiro. Com o objetivo de identificar os genes envolvidos na utilização de queratina em função do tempo de cultivo utilizamos a metodologia de microarranjos de cDNA. Para isto, foram selecionados cerca de 1.500 clones de cDNA (unigenes), oriundos do banco de dados de ESTs de T. rubrum (PipeLine) existente em nosso laboratório para a construção de uma plataforma de microarranjos. Cerca de 5,0 x 10⁶ conídios foram inoculados em meio líquido, composto por 50 mL de água acrescida de queratina em uma concentração de 2,5 g/L em pH inicial de 5,0.  Os conídios foram cultivados nos tempos de 24h, 36h, 48h e 60h, e após cada um desses períodos o RNA total foi extraído e utilizado como sonda para os microarranjos. Os dados foram quantificados e tratados estatisticamente utilizando-se o programa SAM e os genes foram agrupados através do programa Cluster& tree-view. Durante os períodos iniciais de cultivo dos conídios foi possível observar a formação de hifas, e nos períodos mais tardios observou-se a gradual degradação da queratina acompanhado do aumento do pH do meio de cultivo. Os resultados de microarranjos de cDNA permitiram identificar genes diferencialmente expressos durante este processo, supostamente envolvidos nos mecanismos de patogenicidade deste dermatófito, e que se constituem em potenciais alvos para o desenvolvimento de novas drogas antifúngicas.