ÿþ<HTML><HEAD><TITLE>25º Congresso Brasileiro de Microbiologia </TITLE><link rel=STYLESHEET type=text/css href=css.css></HEAD><BODY aLink=#ff0000 bgColor=#FFFFFF leftMargin=0 link=#000000 text=#000000 topMargin=0 vLink=#000000 marginheight=0 marginwidth=0><table align=center width=700 cellpadding=0 cellspacing=0><tr><td align=left bgcolor=#cccccc valign=top width=550><font face=arial size=2><strong><font face=Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif size=3><font size=1>25º Congresso Brasileiro de Microbiologia </font></font></strong><font face=Verdana size=1><b><br></b></font><font face=Verdana, Arial,Helvetica, sans-serif size=1><strong> </strong></font></font></td><td align=right bgcolor=#cccccc valign=top width=150><font face=arial size=2><strong><font face=Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif size=1><font size=1>ResumoID:1706-1</font></em></font></strong></font></td></tr><tr><td colspan=2><br><br><table align=center width=700><tr><td>Área: <b>Genética e Biologia Molecular ( Divisão N )</b><p align=justify><strong><SPAN STYLE="FONT-FAMILY: TIMES NEW ROMAN,TIMES,SERIF;"><FONT SIZE="3">TRANSFORMAÇÃO DE <SPAN STYLE="FONT-STYLE: ITALIC;">BURKHOLDERIA TROPICA</SPAN> UTILIZANDO PLASMÍDEO SINTÉTICO COM MARCAÇÃO POR GENE REPÓRTER</FONT></SPAN> </strong></p><p align=justify><b>Thaís de Freitas Oliveira </b> (<i>Embrapa/UFRRJ</i>); <b>Verônica M. Reis </b> (<i>Embapa CNPAB</i>); <b>José Ivo Baldani </b> (<i>Embapa CNPAB</i>); <b>Stefan Schwab </b> (<i>Embapa CNPAB</i>)<br><br></p><b><font size=2>Resumo</font></b><p align=justify class=tres><font size=2> <span style="font-family: Times New Roman,Times,serif;"><font size="2"><span style="font-style: italic;">Burkholderia tropica</span> é uma bactéria endofítica fixadora de nitrogênio normalmente encontrada em associação com arroz, milho, cana-de-açúcar, sorgo e gramíneas forrageiras. Quando inoculada em cana-de-açúcar em conjunto com outras bactérias endofíticas fixadoras de nitrogênio é capaz de promover o crescimento vegetal, principalmente em solos pobres em N, aumentando a produtividade da cultura agrícola. Esforços têm sido realizados para se compreender os fundamentos dessa interação bactéria-planta-ambiente, e explorar o efeito benéfico desses microrganismos. Entretanto, ainda existe um vasto campo de conhecimento a ser prospectado, como por exemplo, em relação à sua fisiologia, bioquímica e genética. Com o objetivo de avaliar a regulação da expressão gênica em <span style="font-style: italic;">B. tropica</span> foi otimizado um protocolo de transformação da estirpe Ppe8 com um vetor (plasmídeo) de amplo espectro hospedeiro contendo o gene repórter lacZ. Para tanto, foram comparados novos meios de cultura e condições de cultivo em relação aos meios e condições previamente estabelecidos. Também foi determinada a concentração mínima inibitória (CMI) dos antibióticos tetraciclina, ampicilina, canamicina, gentamicina, estreptomicina e cloranfenicol para o crescimento da estirpe Ppe8 visando definir o antibiótico e a concentração adequada para a seleção de células bacterianas transformadas. Além disso, foram testados sete plasmídeos (pHR<span style="font-style: italic;">gfpgus</span>, pTnmod-0GmKm<span style="font-style: italic;">lacZ</span>, pMP4641, pMP5458, pMP4662, pHR<span style="font-style: italic;">gfp</span>Tc e p2) e os parâmetros relacionados ao pulso elétrico aplicado durante o processo de eletroporação. Os resultados mostraram que o antibiótico tetraciclina foi aquele que apresentou menor CMI seguido dos antibióticos gentamicina, canamicina, estreptomicina, cloranfenicol e ampicilina. Desta forma, o antibiótico tetraciclina foi escolhido para os&nbsp; ensaios de transformação da estirpe Ppe8. Dentre os sete plasmídeos testados foi observado células transformadas somente com o plasmídeo p2 que carrega a marca de seleção para tetraciclina e o gene repórter<span style="font-style: italic;"> lacZ.</span> Apesar de a estirpe Ppe8 ter apresentado atividade de <span style="font-family: Symbol;"><span style="font-family: Symbol;">Beta</span>-</span>galactosidase (<span style="font-style: italic;">LacZ</span>) endógena (o que dificultaria a utilização do respectivo gene repórter), o plasmídeo citado ainda apresenta o potencial de uso caso o seu gene repórter for substituído por outros genes do tipo <span style="font-style: italic;">gfp </span>ou <span style="font-style: italic;">gus</span>. Os procedimentos e plasmídeo estabelecidos neste trabalho abrem á possibilidade de se estudar a genética dessa bactéria fixadora de nitrogênio através de fusões gênicas com gene repórter e/ou utilizar a bactéria como vetor de expressão gênica em planta, entre outras aplicações.<span style="font-family: Symbol;"></span></font></span> </font></p><br><b>Palavras-chave: </b>&nbsp;Concentração mínima inibitória, Eletroporação, Gene repórter</td></tr></table></tr></td></table></body></html>