ÿþ<HTML><HEAD><TITLE>25º Congresso Brasileiro de Microbiologia </TITLE><link rel=STYLESHEET type=text/css href=css.css></HEAD><BODY aLink=#ff0000 bgColor=#FFFFFF leftMargin=0 link=#000000 text=#000000 topMargin=0 vLink=#000000 marginheight=0 marginwidth=0><table align=center width=700 cellpadding=0 cellspacing=0><tr><td align=left bgcolor=#cccccc valign=top width=550><font face=arial size=2><strong><font face=Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif size=3><font size=1>25º Congresso Brasileiro de Microbiologia </font></font></strong><font face=Verdana size=1><b><br></b></font><font face=Verdana, Arial,Helvetica, sans-serif size=1><strong> </strong></font></font></td><td align=right bgcolor=#cccccc valign=top width=150><font face=arial size=2><strong><font face=Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif size=1><font size=1>ResumoID:1671-1</font></em></font></strong></font></td></tr><tr><td colspan=2><br><br><table align=center width=700><tr><td>Área: <b>Genética e Biologia Molecular ( Divisão N )</b><p align=justify><strong> ANÁLISE DA EXPRESSÃO GÊNICA DA NITROGENASE, GLUTAMINA E GLUTAMATO SINTETASE POR QRT-PCR EM UM MUTANTE HISTIDINA QUINASE (GDI3079) DE <SPAN STYLE="FONT-STYLE: ITALIC;">GLUCONACETOBACTER DIAZOTROPHICUS</SPAN><SPAN STYLE=""></SPAN> </strong></p><p align=justify><b>Helma Ventura Guedes </b> (<i>CNPAB</i>); <b>Luc Felicianus Marie Rouws </b> (<i>CNPAB</i>); <b>Sylvia Maria Campbel Alquéres </b> (<i>UFRJ</i>); <b>Stefan Schwab </b> (<i>CNPAB</i>); <b>Jean Luiz Simões-araújo </b> (<i>CNPAB</i>); <b>Orlando Bonifácio Martins </b> (<i>UFRJ</i>); <b>José Ivo Baldani </b> (<i>CNPAB</i>)<br><br></p><b><font size=2>Resumo</font></b><p align=justify class=tres><font size=2><div style="text-align: justify;"> Bactérias alteram o seu metabolismo e transcrição de genes frequentemente em função de flutuações ambientais tais como: mudanças na osmolaridade e disponibilidade de nutrientes. Em geral mudanças no meio ou intracelulares são detectadas por mecanismos de transdução de sinais que consistem de uma proteína sensora histidina quinase e um regulador de resposta que mediam a expressão diferencial de genes. Um mutante histidina quinase (GDI3079)<b style=""> </b>de <i style="">Gluconacetobacter diazotrophicus</i> estirpe PAL5 foi obtido pela seleção de mutantes com baixa atividade da nitrogenase, empregando o método de enriquecimento com ampicilina, a partir de uma biblioteca de mutantes Tn5.<span style="">&nbsp; </span>A análise <i style="">in silico</i> da sequência que contém inserção única do Tn5 mostrou que o gene putativo codifica um polipeptídeo de 467 aminoácidos e contém os domíneos HiskA, HATPase_C, Hamp e dois domínios transmembrana. A análise BLAST-P revelou um alto grau de similaridade com a proteína osmo-sensora EnvZ de <i style="">Escherichia coli</i> que está associada ao regulador transcripcional <i style="">ompR</i>, formando um sistema sinalizador de dois componentes. A análise do transcriptoma de <i style="">E. coli</i> <span class="authors">apontou</span> o potencial do sistema EnvZ/OmpR na regulação de mais de 100 genes, sugerindo que OmpR funciona como regulador global. Com o objetivo de avaliar se a expressão dos genes que codificam para a nitrogenase, glutamina e glutamato sintase é afetada no mutante histidina quinase de <i style="">G. diazotrophicus</i> foi desenvolvido o presente trabalho. As estirpes selvagem (PAL5<sup>T</sup>) e mutante foram inoculadas em meio LGI-P líquido contendo 1 mM de sulfato de amônio e mantidas à 30ºC sob agitação de 100 rpm durante 6 dias. Nesse período foi medida a atividade da nitrogenase pela técnica de Redução de Acetileno, e no pico de maior atividade da nitrogenase, foram coletadas células para extração do RNA total e posterior análise por qRT-PCR<b style=""> </b>(real time quantitative RT-PCR). Os resultados demonstram que a expressão relativa da nitrogenase no meio LGI-P é muito menor no mutante do que em PAL5<sup>T</sup>, já a expressão relativa da glutamina e glutamato sintase foi maior (2 vezes e 2,5 vezes respectivamente) no mutante do que na selvagem. Os resultados obtidos sugerem que a histidina quinase (GDI3079) pode estar envolvida com a regulação do processo de Fixação Biológica do Nitrogênio em <i style="">Gluconacetobacter diazotrophicus</i>. </div></font></p><br><b>Palavras-chave: </b>&nbsp;FBN, Histidina quinase, Nitrogenase</td></tr></table></tr></td></table></body></html>