SELEÇÃO DE MUTANTES DE PSEUDOMONAS AERUGINOSA LBI PRODUTORES DE POLIHIDROXIALCANOATOS E RAMNOLIPÍDIOS A PARTIR DE GLICEROL

Fabricio Coutinho de Paula (UNESP-RC); Roberta Barros Lovaglio (UNESP-RC); Jonas Contiero (UNESP-RC)

Atualmente, a necessidade de reduzir a dependência mundial pelo petróleo tem impulsionado o desenvolvimento de tecnologias limpas, associadas à produção de biocombustíveis, para a obtenção de produtos biocompatíveis, provenientes de fontes renováveis. Porém, a introdução destes produtos no mercado ainda torna-se inviável, devido aos elevados custos no processo de produção. Recentemente, com o aumento significativo da produção de biodiesel, gerando um acúmulo do subproduto glicerol, o qual apresenta preços de mercado cada vez mais reduzidos, tornou-se interessante o desenvolvimento de tecnologias de síntese de produtos obtidos através da fermentação de microrganismos, utilizando o glicerol como fonte de carbono. As bactérias do gênero Pseudomonas são capazes de sintetizar polihidroxialcanoatos e biossurfatantes, os quais vêm chamando a atenção por serem biodegradáveis e obtidos a partir de matérias-primas renováveis. Foi avaliado um banco de mutantes obtido a partir de Pseudomonas aeruginosa LBI, utilizando o kit EZ-Tn5™ <KAN-2>Tnp Transposome. Os mutantes obtidos foram preservados em meio Luria Bertani (LB), com glicerol a 20% e a -20°C. Os clones obtidos foram avaliados quanto à produção de polihidroxialcanoatos (PHAs) e biossurfatantes (ramnolipídios). Para avaliar a produção de PHAs, os mutantes foram incubados em Meio Mineral, contendo 10 g/L de glicerol e 0,06 g/L de sulfato de amônio, durante 5 dias a 30°C. Após esse período os clones foram corados com Sudan Black B (0,02% em etanol 96%) por 10 minutos, sendo as linhagens coradas em azul escuro PHA positivos. Para avaliar a produção de ramnolipídios, os clones foram incubados em “Blue Agar”, para a detecção de glicolipídios extracelulares. As linhagens com formação de halo foram consideradas produtoras de ramnolipídios.  Foram obtidos 760 clones, sendo 604 produtores de ramnolipídios e 555 de polihidroxialcanoatos utilizando glicerol como fonte de carbono. Um total de 468 mutantes apresentaram produção de PHAs e ramnolipídios, simultaneamente.