DETERMINAÇÃO DA SIMILARIDADE GENÔMICA ENTRE LINHAGENS DE YERSINIA ENTEROCOLITICA 4/O:3 ISOLADAS DE FEZES DIARREICAS E OSTEOMIELITE MAXILAR DE HUMANOS POR PULSED-FIELD GEL ELECTROPHORESIS

Stella Felippe de Fretiras (FCFRP/USP); Denissani Lima (FMRP/USP); Roberto Antonio de Souza (FCFRP/USP); Fábio Campioni (FCFRP/USP); Juliana Pfrimer Falcão (FCFRP/USP)

Dentre as espécies de Yersinia, a espécie Y. enterocolitica é a mais isolada de doenças em humanos e causa, sobretudo, síndrome gastrointestinal de gravidade variável. Das linhagens isoladas de casos clínicos em humanos no Brasil, o biosorogrupo 4/O:3 é o mais frequente. O presente estudo teve por objetivo analisar a similaridade genômica entre linhagens de Y. enterocolitica 4/O:3 isoladas de diferentes materiais clínicos de humanos através de Pulsed-field Gel Electrophoresis (PFGE). Para isso, foram selecionadas 12 linhagens de Y. enterocolitica 4/O:3, sendo 11 de fezes diarréicas e uma de osteomielite maxilar, pertencentes à coleção do Laboratório Nacional de Referência em Yersinia spp. outras que Y. pestis. Os plugs para PFGE foram preparados a partir da inclusão de culturas puras de cada uma das linhagens em agarose low-melting 2% e posteriormente tratados com lisozima e proteinase K. A restrição enzimática do DNA foi realizada com 30 unidades das endonuclease, Xba I e Xho I. A corrida eletroforética foi feita em gel de agarose PFGE 1,0% no aparelho CHEF-DR III, sob as seguintes condições: pulso inicial de 1s, pulso final de 10s, 6V/cm e ângulo de 120˚C, com duração de 29h. Os dendrogramas de similaridade genômica entre as 12 linhagens foram construídos no programa BioNumerics 5.1, a partir da análise do padrão de bandas obtido, utilizando o algoritmo UPGMA e o cálculo de similaridade utilizando o índice DICE para cada endonuclease. Foram incluídas na análise somente as bandas com peso molecular entre 48,5 Kb e 242,5 Kb. Também foi construído um dendrograma concatenado formado pela congruência dos dois experimentos. A análise do dendrograma concatenado mostrou que existe similaridade genômica de aproximadamente 78% entre as linhagens isoladas de fezes diarréicas e a linhagem isolada de osteomielite maxilar. A técnica de PFGE demonstrou que o biosorogrupo 4/O:3 de Y. enterocolitica apresenta elevada similaridade genômica, independente da origem do material clínico de isolamento.