ISOLAMENTO E CARACTERIZAÇÃO DO GENE QUE CODIFICA O REPRESSOR  NRG1 EM MONILIOPHTORA PERNICIOSA, AGENTE CAUSAL DA VASSOURA-DE-BRUXA NO CACAUEIRO (THEOBROMA CACAO).

Pilar Ximena Lizarazo Medina (U de Antioquia); Marisa Vieira de Queiroz (UFV)

Os fungos são microrganismos versáteis que ocuparam com sucesso numerosos habitats incluindo plantas e animais. Um ponto importante para seu sucesso evolutivo é a capacidade de adaptar-se a uma ampla variedade de condições ambientais. Esta habilidade depende de sensores que monitoram o meio ambiente e mediam a resposta da célula para a expressão dos genes de acordo com a condição presente. Fatores como a fonte de carbono e pH, direcionam essa resposta. Em relação a fonte de carbono, o mecanismo de repressão catabólica é o mais amplamente estudado. Este mecanismo envolve genes que codificam enzimas que participam do metabolismo de açucares, que são reprimidos quando glicose está presente no meio. O maior repressor evidenciado em fungos é proteína CREA que já foi reportada en varios fungos. No presente trabalho reportamos pela primeira  vez a presença do repressor catabólico Nrg1 em fungos filamentosos. O gene putativo que codidfica o repressor catabólico NRG1 de Moniliophtora perniciosa foi clonado e caracterizado. A região codificadora do gene nrg1 possui 2121 pb e é interrompida por um íntron de 60 pb. Uma proteína de 256 aminoácidos foi obtida da tradução deste gene e apresenta dois dedos de zinco. Na região 5´ terminal foram detectados os cis-elementos TATA box, CAAT box e um sítio potencial para a ligação da proteína repressora PACC de resposta ao pH. Análise por hibridização do DNA total mostrou que o gene está presente em cópia única no genoma do fungo. A expressão do gene foi analisada pela técnida de RT-PCR, onde foram avaliados os efeitos da concentração de glicose e do pH no meio de cultura de crescimento do fungo. O gene foi transcricionalmente regulado pela concentração de glicose.  A expressão de nrg1foi 2,1 vezes maior no micélio crescido em meio contendo glicose 0,1% do que no micelio cultivado em meio contendo glicose 3,0%. Em presença de glicerol 1,0%, a expressão foi 4,6 vezes maior do que à observada em presença de glicose 3,0%. Em relação ao pH do meio de cultivo, foi observada uma maior expressão do gene em pH 2 e pH 3 em relação ao pH 4, 6,8 e 8. A repressão de nrg1 mediada por PACC explica a disminuição da expressão em pH alcalino.