CONSTRUÇÃO E CARACTERIZAÇÃO DE UMA LINHAGEM DE CORYNEBACTERIUM PSEUDOTUBERCULOSIS MUTANTE DO GENE PHOP E SUA AVALIAÇÃO COMO VACINA VIVA ATENUADA

Marcilia Pinheiro da Costa (UECE); Fernanda Alves Dorella (UFMG); Tessália Diniz Luerce Saraiva (UFMG); Núbia Seyffert (UFMG); Vivian D' Afonseca (UFMG); Jeronimo Lameira (UFPA); Diana Magalhães de Oliveira (UECE); Maria de Fátima Teixeira (UECE); Anderson Miyoshi (UFMG); Vasco Azevedo (UFMG)

Linfadenite caseosa (LC) é uma enfermidade sistêmica que acomete rebanhos de caprinos e ovinos e constitui uma das principais limitações para o aprimoramento da criação otimizada desses animais, acarretando grandes prejuízos a ovinocaprinocultura brasileira. Entretanto, ainda não existem métodos diagnósticos, vacinas ou tratamentos totalmente eficazes contra esta doença. A escassez de informações sobre as bases moleculares da bactéria Corynebacterium pseudotuberculosis, o agente etiológico da LC, tem despertado o interesse pelo estudo de genes alvos de microrganismos filogeneticamente próximos para o desenvolvimento de vacinas. Testes com linhagens de Mycobacterium tuberculosis com o gene phoP inativado, em alguns modelos animais, tem  demonstrado uma potente resposta imunológica e conferido proteção após o desafio com linhagens virulentas. Baseado na proximidade filogenética, e semelhança na patogenia entre C. pseudotuberculosis e M. tuberculosis o presente trabalho teve como objetivo a construção de uma linhagem de C. pseudotuberculosis com o gene phoP interrompido, e avaliação do perfil imunológico e proteção em modelo murino. O gene phoP de C. pseudotuberculosis 1002, constituído de 714 pb, foi caracterizado molecularmente e apresentou-se organizado em um operon, o qual é composto também pelo gene phoR. Para o desenvolvimento da vacina, um vetor suicida foi construído através da amplificação de um fragmento de 437 pb do gene phoP e posterior clonagem em vetor pTOPO. A construção pTOPO-phoP foi então inserida em C. pseudotuberculosis visando a obtenção de  mutantes phoP^-. A confirmação do mutante deu-se pela combinação de diversos amplicons. Curva de crescimento bacteriano, estudos de viabilidade em macrófagos e o perfil do secretoma estão sendo realizados para a caracterização da linhagem construída. Na avaliação in vivo foram utilizados camundongos BALB/c; estes animais foram imunizados via intraperitoneal com 10⁶ UFC da bactéria atenuada, e desafiados após três semanas com a linhagem virulenta C. pseudotuberculosis MIC-6. Até o momento os resultados se mostraram promissores, apresentando uma proteção parcial contra a infecção por C. pseudotuberculosis. Os dados a serem gerados ao final deste projeto poderão auxiliar de forma significativa no desenvolvimento de uma vacina eficaz contra LC.