TIPAGEM MOLECULAR DE LINHAGENS DE SALMONELLA ENTERITIDIS ISOLADAS DE HUMANOS E ALIMENTOS POR ERIC-PCR

Fábio Campioni (FCFRP - USP); Alzira Maria Morato Bergamini (IAL - RP); Marta Inês Cazentini Medeiros (IAL - RP); Maria Aparecida de Oliveira (IAL - RP); Juliana Pfrimer Falcão (FCFRP - USP)

A doença decorrente da infecção por Salmonella é um dos grandes problemas de saúde no Brasil e no mundo, em termos de morbidade e mortalidade. Entre as sorovariedades do gênero Salmonella, a Enteritidis, por ter seu nicho biológico relacionado a animais ligados a alimentação humana, tornou-se a partir de meados dos anos 80, a mais prevalente como causa de surtos de salmonelose no mundo. Os objetivos desse trabalho foram tipar molecularmente linhagens de Salmonella Enteritidis de origem clínica e de alimentos por Enterobacterial Repetitive Intergenic Consensus (ERIC-PCR) e analisar o poder discriminatório dessa técnica. Foram estudadas 110 linhagens de S. Enteritidis isoladas de fezes de humanos (60) e de diversos alimentos (50), de surtos e casos esporádicos, durante o período de 1986 a 2007. Para ERIC-PCR, foram utilizados 50pmol de cada primer universal de ERIC, 1,25mM de dNTP, 5mM de MgCl₂, 2U de Klen taq®, tampão da enzima 1X e 100ng de DNA genômico. Os ciclos para a PCR foram de desnaturação inicial a 94°C/7min., seguida por 30 ciclos de: 94°C/30s, 52°C/1 min. e 65°C/8min e extensão final de 65°C/10min. A construção do dendrograma de similaridade genotípica foi realizada pelo programa BioNumerics 5.1, utilizando-se o algoritmo UPGMA e o cálculo de similaridade utilizando o índice DICE. O cálculo do índice de discriminação (ID) foi baseado numa variação do Índice de Diversidade de Simpson. O ID de ERIC-PCR foi de 0,99. As linhagens foram agrupadas em quatro grupos denominados A, B, C e D. A similaridade genotípica entre as linhagens foi de aproximadamente 65% para as do grupo A, 68% para as do B, 70% para as do C e 59% para as do D. Ademais, entre as 107 linhagens pertencentes aos grupos A, B e C observou-se similaridade > 62%. Linhagens isoladas de um mesmo surto, de diferentes materiais, apresentaram similaridade que variou entre 62% e 100%. A técnica de ERIC-PCR apresentou um alto poder discriminatório, sendo que apenas quatro linhagens, isoladas de dois surtos, foram indistinguíveis entre si. Os resultados demonstram que a maioria das linhagens de Salmonella Enteritidis analisadas, isoladas de humanos e de alimentos, de surtos e de casos esporádicos, não variou muito sua estrutura genotípica ao longo de 21 anos.