ÿþ<HTML><HEAD><TITLE>25º Congresso Brasileiro de Microbiologia </TITLE><link rel=STYLESHEET type=text/css href=css.css></HEAD><BODY aLink=#ff0000 bgColor=#FFFFFF leftMargin=0 link=#000000 text=#000000 topMargin=0 vLink=#000000 marginheight=0 marginwidth=0><table align=center width=700 cellpadding=0 cellspacing=0><tr><td align=left bgcolor=#cccccc valign=top width=550><font face=arial size=2><strong><font face=Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif size=3><font size=1>25º Congresso Brasileiro de Microbiologia </font></font></strong><font face=Verdana size=1><b><br></b></font><font face=Verdana, Arial,Helvetica, sans-serif size=1><strong> </strong></font></font></td><td align=right bgcolor=#cccccc valign=top width=150><font face=arial size=2><strong><font face=Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif size=1><font size=1>ResumoID:1520-1</font></em></font></strong></font></td></tr><tr><td colspan=2><br><br><table align=center width=700><tr><td>Área: <b>Genética e Biologia Molecular ( Divisão N )</b><p align=justify><strong>EXPRESSÃO DA E-NTPDASE DE <SPAN STYLE="FONT-STYLE: ITALIC;">LEISHMANIA MAJOR "</SPAN>GDPASE" EM <SPAN STYLE="FONT-STYLE: ITALIC;">KLUYVEROMICES LACTIS</SPAN> </strong></p><p align=justify><b>Yaro Luciolo dos Santos </b> (<i>UFV</i>); <b><u>Carolina Maria de Araújo dos Santos </u></b> (<i>UFV</i>); <b>Márcia Rogéria Almeida </b> (<i>UFV</i>); <b>Juliana Lopes Rangel Fietto </b> (<i>UFV</i>); <b>Flávia Maria Lopes Passos </b> (<i>UFV</i>)<br><br></p><b><font size=2>Resumo</font></b><p align=justify class=tres><font size=2> <div style="text-align: justify;"><span style="font-family: Arial,Helvetica,sans-serif;">A levedura </span><span style="font-style: italic; font-family: Arial,Helvetica,sans-serif;">Kluyveromices lactis </span><span style="font-family: Arial,Helvetica,sans-serif;">apresenta potencial aplicabilidade biotecnológica como hospedeira na produção heteróloga de proteínas recombinantes de interesse biotecnológico. Neste contexto o objetivo deste trabalho foi expressar a proteína GDPase de </span><span style="font-style: italic; font-family: Arial,Helvetica,sans-serif;">Leishmania major </span><span style="font-family: Arial,Helvetica,sans-serif;">para fins biotecnológicos aplicados às leishmanioses humana e canina. A GDPase de </span><span style="font-style: italic; font-family: Arial,Helvetica,sans-serif;">L. major</span><span style="font-family: Arial,Helvetica,sans-serif;"> pertence à família das E-NTPDases ou apirases, proteínas envolvidas na infectividade e virulência de parasitos. Para obter um sistema de expressão e secreção heteróloga desta proteína em </span><span style="font-style: italic; font-family: Arial,Helvetica,sans-serif;">K. lactis,</span><span style="font-family: Arial,Helvetica,sans-serif;"> a técnica da Reação da Polimerase em Cadeia (PCR) foi utilizada para amplificar uma sequência de 2073 pb referente à região codificante completa da "GDPase" de </span><span style="font-style: italic; font-family: Arial,Helvetica,sans-serif;">L. major</span><span style="font-family: Arial,Helvetica,sans-serif;">, sendo este amplicon inserido no plasmídeo pKLAC1 nos sítios Sal I e Bgl II. A construção pKLAC1-GDPase foi confirmada por PCR, linearizada pela enzima Ahd I e utilizada para transformação da cepa selvagem CBS 2359. Os transformantes foram selecionados em meio YCB contendo 5mM de acetamida e induzidos em batelada em YPGal. Extrato e sobrenadante destas culturas foram analisados por SDS-PAGE e Western Blot utilizando um anti-soro policlonal anti GDPase de </span><span style="font-style: italic; font-family: Arial,Helvetica,sans-serif;">L. major</span><span style="font-family: Arial,Helvetica,sans-serif;">. As análises revelaram uma única proteína de cerca de 120 kDa nas cepas selvagem e transformantes de </span><span style="font-style: italic; font-family: Arial,Helvetica,sans-serif;">K. lactis</span><span style="font-family: Arial,Helvetica,sans-serif;">. Fazendo uma pesquisa no Genbank encontramos dois genes homólogos no genoma da levedura: KIGDA1 e KIYND1 que podem explicar a reatividade cruzada. Os resultados apontam para não obtenção dos transformantes produtores da GDPase de </span><span style="font-style: italic; font-family: Arial,Helvetica,sans-serif;">L. major</span><span style="font-family: Arial,Helvetica,sans-serif;">, provavelmente devido a não reconstituição do promotor P</span><sub style="font-family: Arial,Helvetica,sans-serif;">lac4</sub><span style="font-family: Arial,Helvetica,sans-serif;"> que dirigia a expressão do gene da GDPase. Porém levanta as hipóteses de que a cepa selvagem possa ser testada quanto à indução da produção de anticorpos contra espécies do gênero Leishmania e de sinalizar que o sistema utilizado contém falhas que comprometem seu uso, devido à dependência de reconstituição do promotor P</span><sub style="font-family: Arial,Helvetica,sans-serif;">lac4</sub><span style="font-family: Arial,Helvetica,sans-serif;">. (CAPES)<br><br></span></div> </font></p><br><b>Palavras-chave: </b>&nbsp;Apirases, GDPase, Kluyveromyces lactis, Leishmania major, pKLAC1</td></tr></table></tr></td></table></body></html>