PERSISTÊNCIA INTRACELULAR DE AMOSTRAS DE ESTREPTOCOCOS DO GRUPO B EM VACÚOLOS ACÍDICOS DE CÉLULAS EPITELIAIS RESPIRATÓRIAS A549

Camila Serva Pereira (UERJ); Andréia Ferreira Eduardo Costa (UERJ); Joselis de Oliveira Presidio (UERJ); Beatriz Jandre Ferreira (UERJ); Prescilla Emy Nagao Ferreira (UERJ)

Estreptococos do grupo B (EGB) são a principal causa de sepse bacteriana, pneumonia e meningite em recém-nascidos. Dentre os dez sorotipos identificados até o momento, o sorotipo III é o mais prevalente em neonatos e o sorotipo V em adultos imunocomprometidos. A patogenia das infecções é um processo que inclui a capacidade da bactéria em aderir, colonizar e invadir células epiteliais, favorecendo a disseminação bacteriana. O objetivo deste trabalho foi avaliar a capacidade citoadesiva de quatro amostras de EGB sorotipos III (90356-líquor e 80340-vagina) e V (90186-sangue e 88641-vagina) com células do epitélio pulmonar A549, bem como a persistência e fusão bacteriana com compartimentos acídicos no interior da linhagem epitelial. Para quantificação da aderência e persistência intracelular dos EGB em células A549 foi utilizado o método de exclusão da penicilina e gentamicina. Monocamadas de células A549 tratadas com lysotracker vermelho (75nM) e infectadas com EGB marcado com isotiocianato de fluoresceína (FITC, 1µg/mL) foram utilizadas para identificação de vacúolos acídicos por microscopia confocal a laser. Dentre o sorotipo III, a amostra 90356 demonstrou maior habilidade adesiva e invasiva (P<0,05). Em relação ao sorotipo V, a amostra 88641 apresentou maior aderência (P<0,05) e a amostra 90186 maior invasão celular (P<0,05). A aderência dos EGB em células A549 foi confirmada pela microscopia eletrônica de varredura. As duas amostras do sorotipo III e a amostra 90186 demonstraram persistência intracelular sem replicação no epitélio pulmonar após 24h de interação. Porém, a amostra 88641 não apresentou persistência após 30min no interior do epitélio. Através da co-localização da marcação lysotracker-FITC foi possível observar a presença de EGB em vacúolos acídicos. Esses resultados demonstram que amostras de EGB do sorotipo III e V foram capazes de aderir, invadir e persistir em compartimentos acídicos intracelulares de células epiteliais A549, exceto a amostra 88641, que não apresentou viabilidade intracelular após 30min. Além disso, o fato de permanecer até 24h no interior da linhagem A549 constitui um importante fator de virulência dos EGB por conferir um mecanismo de escape da resposta imunológica do hospedeiro e favorecer a disseminação bacteriana.