IDENTIFICAÇÃO DE UM PLASMÍDEO LINEAR DE MYCOBACTERIUM AVIUM

Michelle Christiane da Silva Rabello (UNIFESP); Rosa Maria Silva (UNIFESP); Sylvia Cardoso Leão (UNIFESP)

Elementos genéticos móveis podem ser trocados promiscuamente entre bactérias e contribuem para sua diversidade genética. Muitos genomas bacterianos contêm um ou mais profagos e outros elementos móveis, como sequências de inserção, transposons e plasmídeos. Cogita-se que esses elementos genéticos tenham grande influência na evolução dos hospedeiros bacterianos, por exemplo, mediando transferência horizontal de genes. Recentemente em nosso laboratório, partir de experimentos de eletroforese de campo pulsado (PFGE), identificou-se um elemento extracromossômico em uma cepa de Mycobacterium avium isolada de um paciente HIV positivo. Neste trabalho, caracterizamos parcialmente o elemento extracromossomal detectado em M. avium. Para isso foi realizada PFGE em diferentes condições de corrida e experimentos com exonucleases e topoisomerase I. A análise da migração do elemento extracromossomal nos géis de PFGE em diferentes intervalos de tempo de alternância dos campos elétricos(5-50s, 1-30s e 1,6-21,3s) mostrou que esse elemento é um plasmídeo linear de aproximadamente 100 kb. A banda do DNA extracromossomal foi cortada do gel de PFGE e tratada com exonuclease III, exonuclease lambda e com topoisomerase I. Depois da digestão, os blocos de DNA foram submetidos a eletroforese no aparelho CHEF-DR III (Bio-Rad). O plasmídeo foi sensível a exonuclease III e reistente a topoisomerase I, confirmando sua lineridade. Além disso, este elemento foi resistente a exonuclease lambda, sugerindo a presença de proteína covalentemente ligada em seus terminais 5`. Plasmídeos lineares (variando de 20 a 320 kb) já foram descritos em Mycobacterium xenopi, Mycobacterium branderi e Mycobacterium celatum, porém, pouco se sabe sobre os genes que estes elementos carregam e suas funções. O sequenciamento deste plasmídeo linear de M. avium e posterior análise bioinformática fornecerão informações importantes a respeito dos genes que este elemento porta e sua possível relação com a virulência, evolução e diversidade genética de micobactérias.