ÿþ<HTML><HEAD><TITLE>25º Congresso Brasileiro de Microbiologia </TITLE><link rel=STYLESHEET type=text/css href=css.css></HEAD><BODY aLink=#ff0000 bgColor=#FFFFFF leftMargin=0 link=#000000 text=#000000 topMargin=0 vLink=#000000 marginheight=0 marginwidth=0><table align=center width=700 cellpadding=0 cellspacing=0><tr><td align=left bgcolor=#cccccc valign=top width=550><font face=arial size=2><strong><font face=Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif size=3><font size=1>25º Congresso Brasileiro de Microbiologia </font></font></strong><font face=Verdana size=1><b><br></b></font><font face=Verdana, Arial,Helvetica, sans-serif size=1><strong> </strong></font></font></td><td align=right bgcolor=#cccccc valign=top width=150><font face=arial size=2><strong><font face=Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif size=1><font size=1>ResumoID:1420-1</font></em></font></strong></font></td></tr><tr><td colspan=2><br><br><table align=center width=700><tr><td>Área: <b>Microbiologia de Alimentos ( Divisão K )</b><p align=justify><strong><SPAN STYLE="FONT-WEIGHT: BOLD;">DETECÇÃO DE CÉLULAS VIÁVEIS DE</SPAN> <SPAN STYLE="FONT-STYLE: ITALIC;">LISTERIA MONOCYTOGENES</SPAN> <SPAN STYLE="FONT-WEIGHT: BOLD;">POR EMA-PCR</SPAN> </strong></p><p align=justify><b><u>Rosinéa Aparecida de Paula </u></b> (<i>AgroGenética</i>); <b>Renata Flávia Ferreira E Freitas </b> (<i>AgroGenética</i>); <b>Marta Fonseca Martins Guimarães </b> (<i>Embrapa</i>); <b>Francismar Corrêa Marcelino </b> (<i>Embrapa</i>); <b>Edna Froeder Arcuri </b> (<i>Embrapa</i>)<br><br></p><b><font size=2>Resumo</font></b><p align=justify class=tres><font size=2> <div style="text-align: justify;"><span style="font-style: italic;">Listeria monocytogenes </span>é considerada um dos maiores problemas de segurança alimentar, sendo que um baixo número de células pode ser capaz de iniciar a infecção em pessoas susceptíveis. Vários <span style="font-style: italic;">kits</span>, baseados em análises de DNA, permitem a detecção desta bactéria, porém estes testes apresentam limitações uma vez que qualquer molécula de DNA alvo, tanto de células viáveis quanto de células mortas presentes numa amostra, pode ser amplificada. O corante EMA (Brometo de Etídeo Monoazida) tem sido recentemente utlizado para discriminar células viáveis de inviávies para análise em PCR.O EMA liga-se covalentemente ao DNA de células mortas impedindo a sua amplificação pela DNA Polimerase.O objetivo deste trabalho foi determinar a concentração de EMA necessária para inibir a amplificação de DNA de células iniviáveis de <span style="font-style: italic;">L. monocytogenes </span>sem inibir a amplificação de DNA de células viáveis, por PCR convencional. Concentrações variadas da solução estoque de EMA (0; 0,13; 0,25; 0,5; 1 ; 3 e 5 <font style="font-family: Symbol;" size="3">u</font><span style="font-family: Symbol;"></span>g/mL) foram adicionadas em microtubos contendo 500 ul de 10<sup>8</sup> células viáveis ou inviáveis de <span style="font-style: italic;">L. monocytogenes </span>ATCC 7644 (tratamento térmico de 98 <sup>o</sup>C/20 minutos). Os microtubos foram expostos à luz (650 W) para ativação e fotólise do EMA e em seguida foi realizada a extração de DNA e PCR. O DNA foi extraído após tratamentos subsequentes das células com proteases e fervura. As reações de amplificação continham 200 ng de DNA, 40 pmoles de cada <span style="font-style: italic;">primer</span> (LM1 e LM2 que amplificam um fragmento de 702 pb do gene <span style="font-style: italic;">hlyA</span>), 25 mM de cada dNTPs, 50 mM de MgCl<sub>2, </sub>Tampão de PCR 1 X e 1U de Taq DNA Polimerase. Os produtos da amplificação foram analisados em gel de agarose 1,5% e corados em brometo de etídeo. Os resultados obtidos mostram que a amplificação do DNA alvo de células inviáveis foi completamente inibida quando estas foram tratadas com EMA à concentração de 1 ug/mL. As células viáveis de <span style="font-style: italic;">L. monocytogenes </span>foram tratadas com EMA até a concentração de 5 ug/mL e a amplificação ocorreu em todos os tratamentos. Conclui-se que, por análise em PCR convencional, a concentração de EMA necessária para inibir a amplificação de DNA de células inviáveis de <span style="font-style: italic;">L. monocytogenes</span> sem inibir&nbsp; a amplificação de células viáveis é de 1 ug/mL.Sendo assim, esta técnica pode ser usada para detecção apenas de células viáveis de <span style="font-style: italic;">L. monocytogenes</span> presente numa amostra.<br><span style="font-weight: bold;">Palvavras-chaves</span>: Células viáveis, EMA-PCR, <span style="font-style: italic;">Listeria monocytogenes</span><br>Apoio Financeiro: FAPEMIG<br><br></div><br><span style="font-family: Symbol;"></span> </font></p><br><b>Palavras-chave: </b>&nbsp;Células Viáveis, EMA-PCR, Listeria monocytogenes</td></tr></table></tr></td></table></body></html>