ANÁLISE DA EXPRESSÃO DE GENES DE MACRÓFAGOS ALVEOLARES DURANTE UMA CINÉTICA DE INTERAÇÃO COM O PARACOCCICIOIDES BRASILIENSIS E FRAÇÕES DO FUNGO.

Laura Maria Barbosa Gonçalves (UNB); Simoneide Souza Silva (UNB); Yanna Karla de Medeiros Nóbrega (UNB); Anamélia Lorenzetti Bocca (UNB); Maria Sueli Soares Felipe (UNB)

Paracoccidioides brasiliensis é um importante patógeno humano que causa a paracoccidioidomicose(PCM),uma micose sistêmica com ampla distribuição na América Latina.A adesão e invasão de células são eventos essenciais envolvidos na infecção e disseminação do patógeno.A interação entre P.brasiliensis e macrófago é bastante complexa e representa um determinante primário no desenvolvimento da infecção,podendo resultar na proliferação do fungo em hospedeiros susceptíveis.A ativação adequada dos macrófagos alveolares e a expressão de genes que ativam os mecanismos microbicidas dos macrófagos são elementos chaves na erradicação desta doença. Dados previamente descritos na literatura demonstram que a fração F1 isolada do fungo,cujo principal componente é a b-1,3-glucana,é um importante imunomodulador, promovendo o recrutamento de células inflamatórias e estimulando a produção de citocinas pró-inflamatórias incluindo o Tnf-a.Outro componente importante na interação entre o hospedeiro e o fungo é a fração F2,constituída pela a-1,3-glucana que está comumente relacionada à virulência.A mudança na composição da parede celular durante a infecção, como ocorre em P.brasiliensis,pode ser considerada como um mecanismo de escape da resposta imune inata.Dessa forma,a a-1,3-glucana localizada mais externamente na parede celular, deve atuar como um protetor de b-1,3-glucana contra os mecanismos de defesa do hospedeiro,uma vez que a b-1,3-glucana é capaz de induzir um aumento da liberação do Tnf-a,com consequente morte do fungo.Desta forma, o objetivo deste trabalho foi avaliar a expressão de genes chaves no processo inflamatório utilizando macrófagos alveolares MHS.Metodologia: Os macrófagos foram incubados por diferentes períodos (6,24 e 48h) com leveduras e frações F1 e F2 do fungo da cepa 01 do P.brasiliensis. A partir do RNA total extraído pelo método do reagente trizol, do macrófago infectado e não-infectado com:P.brasiliensis,F1 e F2.O cDNA foi sintetizado e utilizado na PCR em tempo real para avaliar a expressão dos genes:Itga5,Toll4,Tnf-a,Clec2,Nfkb,Nfkr.Os resultados preliminares indicam que a F1 nos tempos de 6 e 48h de interação induziu nos macrófagos alveolares MHS a expressão de todos os genes analisados e no tempo de 24h modulou positivamente somente o Clec2.A F2 no tempo de 6h modulou positivamente os genes Toll4,Tnf-a,Clec2,Nfkb e Nfkr.Em 24 e 48h induziu os genes Itga5,Toll4,Clec2 e Nfkb.A interação de 6h do PB01 com os macrófagos alveolares MHS induziu os genes Toll4,Tnf-a,Clec2,Nfkb e Nfkr.No tempo de 24h modulou positivamente os genes Itga5,Clec2 e Nfkr.Em 48h de interação do PB01 com os macrófagos alveolares MHS todos os genes foram modulados negativamente.Portanto a modulação positiva desses genes nos tempos iniciais de interação (6 e 24h) indicam uma possível ativação dos macrófagos.