25º Congresso Brasileiro de Microbiologia

25º Congresso Brasileiro de Microbiologia

ResumoID:1341-1

Área: Genética e Biologia Molecular ( Divisão N )

DESENVOLVIMENTO DE METODOLOGIA DE BIOENSAIO EM MICRO ESCALA PARA A UTILIZAÇÃO DE PEPTÍDEOS ANTIMICROBIANOS CONTRA FUNGOS

João Suender Moreira (UCB); Suzana Meira Ribeiro (UCB); Octávio Luiz Franco (UCB); Simoni Campos Dias (UCB)

Resumo

Os fungos representam um grupo extremamente diverso de organismos, distribuídos em todos os ecossistemas. As infecções em plantas causadas por fungos resultam anualmente em enormes perdas, sendo causas de severos problemas sociais e econômicos. Do mesmo modo, diversas espécies de fungos causadores de doenças em humanos tem se destacado devido a um aumento de infecções, principalmente nos imunocomprometidos. Várias pesquisas têm sido realizadas na busca de alternativas de controle desses fungos, onde os peptídeos antimicrobianos tem se mostrado como uma promissora alternativa sendo vários ensaios demonstrando sua eficiência já foram relatados. Entretanto, os ensaios qualitativos para comprovação dessa eficiência têm sido dificultados pela enorme multiplicidade de peptídeos utilizados e pela dificuldade visual na avaliação de sua efetividade. Neste sentido, este trabalho descreve o desenvolvimento de uma nova metodologia de bioensaio em micro-escala utilizando fungos miceliais. Os fungos Botrytis cinerea, Fusarium oxysporum e Colletotrichum gloesporioides foram crescidos em meio BDA no escuro por 10 dias e seus esporos foram ressuspensos em 3 mL de água Milliq e filtrados em gase. Em seguida, foi adicionado 1 µL de Tween 20 e feita a contagem dos esporos respectivosem microplaca de Elisa com 96 poços e fundo plano. Em cada poço foram adiconadoscolocados 3000 esporos sendo usados como controle positivo (itraconazol), água Milliq (controle negativo) e meio BDA num volume final de 150 µL. Cada experimento foi conduzido em quintuplicata. A placa foi agitada por alguns segundos e deixada 30 minutos em descanso. Posteriormente, foi realizada uma leitura a 595 nm num leitor de microplacas. A placa foi colocada no escuro em um shaker a 25^oC e 80 RPM e a cada 12 horas feito novas leituras. Os resultados mostram em uma curva de crescimento, uma taxa de mortalidade de 89%, 100% e 74% em F. Oxysporum, C. Gloesporioides e B. cinerea respectivamente, para o controle positivo. Com esta metodologia, é possível de forma prática e rápida quantificar acuradamente os efeitos de peptídeos antimicrobianos a serem testados contra fungos.

Palavras-chave: Microensaios, peptídeos antimicrobianos, atividade antifúngica

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