ÿþ<HTML><HEAD><TITLE>25º Congresso Brasileiro de Microbiologia </TITLE><link rel=STYLESHEET type=text/css href=css.css></HEAD><BODY aLink=#ff0000 bgColor=#FFFFFF leftMargin=0 link=#000000 text=#000000 topMargin=0 vLink=#000000 marginheight=0 marginwidth=0><table align=center width=700 cellpadding=0 cellspacing=0><tr><td align=left bgcolor=#cccccc valign=top width=550><font face=arial size=2><strong><font face=Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif size=3><font size=1>25º Congresso Brasileiro de Microbiologia </font></font></strong><font face=Verdana size=1><b><br></b></font><font face=Verdana, Arial,Helvetica, sans-serif size=1><strong> </strong></font></font></td><td align=right bgcolor=#cccccc valign=top width=150><font face=arial size=2><strong><font face=Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif size=1><font size=1>ResumoID:1306-1</font></em></font></strong></font></td></tr><tr><td colspan=2><br><br><table align=center width=700><tr><td>Área: <b>Microbiologia Geral ( Divisão H )</b><p align=justify><strong><P ALIGN=CENTER>MÉTODO DE DETECÇÃO DE GENES ENVOLVIDOS NA SÍNTESE DE POLÍMERO BIODEGRADÁVEL EM ESPÉCIES DO GÊNERO <EM>BURKHOLDERIA.</EM></P></strong></p><p align=justify><b><u>Yeimy Paola Galindo Rozo </u></b> (<i>USP</i>); <b>Erica Mendes Pereira </b> (<i>USP</i>); <b>Jose Gregório Cabrera Gomez </b> (<i>USP</i>); <b>Luiziana Ferreira da Silva </b> (<i>USP</i>)<br><br></p><b><font size=2>Resumo</font></b><p align=justify class=tres><font size=2><P style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt" class=MsoNormal align=justify><FONT face="Times New Roman, Times, serif"><SPAN style="mso-ansi-language: PT-BR">Polihidroxialcanoatos (PHA) são polímeros biodegradáveis produzidos e acumulados intracelularmente por muitos microrganismos. A enzima PHA sintase (PhaC) é a responsável pela polimerização de hidroxiacil-CoA, monômero precursor do polímero PHA. Baseadas em suas propriedades estruturais e especificidade de substrato estas enzimas são agrupadas nas classes I, II, III e IV. Espécies do gênero <I style="mso-bidi-font-style: normal">Burkholderi</I>a apresentam apenas a classe I de PhaC, capaz de polimerizar monômeros com cadeia carbônica curta (<?xml:namespace prefix = st1 ns = "urn:schemas-microsoft-com:office:smarttags" /><st1:metricconverter w:st="on" ProductID="3 a">3 a</st1:metricconverter> 5 átomos de carbono). O operon envolvido na síntese de PHA apresenta diferentes organizações genéticas, mas, em <I style="mso-bidi-font-style: normal">Burkholderia</I> é formado pelos genes <I style="mso-bidi-font-style: normal">phaC, phaA, phaB</I>, que codificam, respectivamente a PHA sintase, a 3- cetotiolase, e a 3-acetoacil-CoA redutase. Neste trabalho, foram feitos alinhamentos de seqüências disponíveis em bancos de dados referentes aos nucleotídeos dos genes <I style="mso-bidi-font-style: normal">phaC </I>de <I style="mso-bidi-font-style: normal">Burkholderia. </I>Foram desenhados primers degenerados específicos para diferentes grupos de espécies desse gênero (3 diretos e 2 reversos). Utilizando técnicas de amplificação por PCR, as diferentes combinações destes primers foram testadas frente ao DNA genômico de 30 linhagens pertencentes ao gênero <I style="mso-bidi-font-style: normal">Burkholderia </I>isoladas de diferentes ambientes. Os produtos de amplificação foram clonados no vetor pGEM-T Easy e seqüenciados. Os primers reversos desenhados, </SPAN><SPAN style="mso-fareast-language: PT-BR; mso-ansi-language: PT-BR">não permitiram evidenciar nenhuma diferença quando testados com o mesmo primer direto, provavelmente pela alta similaridade destes primers. </SPAN><SPAN style="mso-ansi-language: PT-BR">15 linhagens apresentaram amplicons com a combinação de primers específicos para <I style="mso-bidi-font-style: normal">B. cepacia </I>e<I style="mso-bidi-font-style: normal"> B. cenocepacia</I>. As 15 linhagens restantes incluindo <I style="mso-bidi-font-style: normal">B. sacchari</I> LFM101 apresentaram amplicon apenas quando testada com os primers </SPAN><SPAN style="mso-fareast-language: PT-BR; mso-ansi-language: PT-BR">FPE1/RPE1</SPAN><SPAN style="mso-ansi-language: PT-BR"> os quais foram desenhados a partir das seqüências de <I style="mso-bidi-font-style: normal">B. xenovorans</I>, <I style="mso-bidi-font-style: normal">B. phymatum</I> e <I style="mso-bidi-font-style: normal">B. phytofirmans</I>. Todas as linhagens foram testadas com o par de primers FPE3/RPE1 e não foi observado nenhum produto de amplificação por PCR. O resultado foi o esperado, pois o primer FPE3 foi construído a partir das seqüências de <I>B. mallei </I>e <I>B. pseudomallei</I>, conhecidas como patôgenos humanos e as linhagens usadas foram isoladas de amostras ambientais de cana de açúcar e solo contaminado com BTEX, presumindo a não existência destas espécies. Para verificar a seletividade dos primers diretos, todas as linhagens foram testadas com as três combinações possíveis. Todos os pares de primers foram efetivos para amplificar o gene <I style="mso-bidi-font-style: normal">phaC</I> de </SPAN><I><SPAN style="mso-fareast-language: PT-BR; mso-ansi-language: PT-BR">Burkholderia spp.</SPAN></I><SPAN style="mso-ansi-language: PT-BR"> apresentando amplicons do tamanho esperado (Aprox. 2,2Kb) e permitindo separar e distinguir 3 grupos de <I style="mso-bidi-font-style: normal">Burkholderia.</I><?xml:namespace prefix = o ns = "urn:schemas-microsoft-com:office:office" /><o:p></o:p></SPAN></FONT></P> <P style="TEXT-ALIGN: justify; MARGIN: 0cm 0cm 0pt; mso-layout-grid-align: none" class=MsoNormal align=justify><SPAN style="mso-ansi-language: PT-BR"><o:p><FONT face="Times New Roman, Times, serif">&nbsp;</FONT></o:p></SPAN></P> <P style="TEXT-ALIGN: justify; MARGIN: 0cm 0cm 0pt; mso-layout-grid-align: none" class=MsoNormal align=justify><SPAN style="mso-ansi-language: PT-BR"><FONT face="Times New Roman, Times, serif">Apoio: Capes</FONT></SPAN></P></font></p><br><b>Palavras-chave: </b>&nbsp;Burkholderia, PHA-sintase, Polímeros biodegradáveis</td></tr></table></tr></td></table></body></html>