ANÁLISE ESTRUTURAL E IMUNOLÓGICA DE POLISSACARÍDEOS DA PAREDE CELULAR DE ASPERGILLUS FLAVUS

Kethelin Lagni (UNIRIO); Patrícia Incerte Filzzola (UNIRIO); Adriana da Silva Caneppa (UNIRIO); Renata Oliveira da Rocha Calixto (UFRJ, IMPPG); Rodrigo Rollin Pinheiro (UFRJ, IMPPG); Vera Carolina Bordallo Bittencourt (UFRJ, IMPPG); Eliana Barreto Bergter (UFRJ, IMPPG); Rosa Maria Tavares Haido (UNIRIO)

Aspergillus flavus é o segundo agente causador de aspergilose invasiva após Aspergillus fumigatus. Manifestações clínicas (pele, mucosa, tecido subcutâneo) associadas ao A. flavus diferem das observadas para A. fumigatus. Características de superfície são determinantes importantes nessa localização, sendo a parede celular uma fonte de moléculas responsáveis pela virulência e patogenicidade desses fungos. Poucos estudos sobre antígenos de superfície de A. flavus foram descritos. Uma glicoproteína de 35 KDa reagiu fortemente com soro de coelho imunizado com micélio de A. flavus (SIC) e com soro de pacientes com aspergilose por A. flavus (ELISA e WB). Demonstrou-se que sua porção carboidrato era responsável pela antigenicidade. Em nosso trabalho, obtivemos um polissacarídeo bruto (PB) de micélio de A. flavus (2% KOH/2h/100ºC) (6,5% proteína e 52,5% açúcar) que foi fracionado em coluna de gel filtração Superdex 200(HPLC) originando duas frações (Fr1 e Fr2). Os conteúdos de açúcar (25 e 22,5 %, respectivamente) e proteína (3,12 e 0,31%, respectivamente) foram determinados por métodos colorimétricos. Análises qualitativa e quantitativa dos componentes monossacarídicos foram feitas por cromatografia de camada fina(HPTLC) e cromatografia gasosa(CG), após hidrólise ácida (TFA 3M/3h/100ºC). Glicose, manose e galactose foram os principais açúcares presentes nas frações (1,0:1,3:1,7 e 1,6:1,3:1,0, respectivamente). Pela técnica de ELISA, verificou-se a especificidade do SIC utilizando uma glicoproteína bruta(GPb) e uma purificada(FL) (10 e 20 µg/ml) como antígenos. O SIC apresentou reatividade com a GPb e FL(1/1600 e 1/400, respectivamente). Em experimentos de inibição de ELISA observamos uma forte inibição da reatividade com FL, quando o SIC foi pré-incubado com o PB independente das concentrações utilizadas (5, 10 e 15 µg/ml). Estudos de interação de conídios de A. flavus com macrófagos estão em andamento, para analisar a participação dessas moléculas na patogênese e estimulação da resposta inflamatória pelo fungo.