ÿþ<HTML><HEAD><TITLE>25º Congresso Brasileiro de Microbiologia </TITLE><link rel=STYLESHEET type=text/css href=css.css></HEAD><BODY aLink=#ff0000 bgColor=#FFFFFF leftMargin=0 link=#000000 text=#000000 topMargin=0 vLink=#000000 marginheight=0 marginwidth=0><table align=center width=700 cellpadding=0 cellspacing=0><tr><td align=left bgcolor=#cccccc valign=top width=550><font face=arial size=2><strong><font face=Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif size=3><font size=1>25º Congresso Brasileiro de Microbiologia </font></font></strong><font face=Verdana size=1><b><br></b></font><font face=Verdana, Arial,Helvetica, sans-serif size=1><strong> </strong></font></font></td><td align=right bgcolor=#cccccc valign=top width=150><font face=arial size=2><strong><font face=Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif size=1><font size=1>ResumoID:804-1</font></em></font></strong></font></td></tr><tr><td colspan=2><br><br><table align=center width=700><tr><td>Área: <b>Microbiologia de Alimentos ( Divisão K )</b><p align=justify><strong><P>DETECÇÃO DE CAMPYLOBACTER JEJUNI EM CARCAÇAS DE FRANGO POR PCR EM TEMPO REAL</P></strong></p><p align=justify><b><u>Kérley Braga Pereira Bento Casaril </u></b> (<i>UNIOESTE</i>); <b>Gislayne Trindade Villas-bôas </b> (<i>UEL</i>); <b>Giselle Aparecida Costa Nobre </b> (<i>UEL</i>); <b>Francismar Corrêa Marcelino </b> (<i>Embrapa</i>); <b>Tereza Cristina Rocha Moreira de Oliveira </b> (<i>UEL</i>)<br><br></p><b><font size=2>Resumo</font></b><p align=justify class=tres><font size=2><P class=MsoNormal style="MARGIN: 0cm -21.35pt 10pt 0cm; LINE-HEIGHT: 150%; TEXT-ALIGN: justify"><I><SPAN style="FONT-SIZE: 10pt; LINE-HEIGHT: 150%; FONT-FAMILY: 'Arial','sans-serif'">Campylobacter </SPAN></I><SPAN style="FONT-SIZE: 10pt; LINE-HEIGHT: 150%; FONT-FAMILY: 'Arial','sans-serif'">é reconhecida mundialmente como a causa mais freqüente de gastrenterite bacteriana e C.<I> jejuni </I>é a espécie mais associada à campilobacteriose humana. A infecção intestinal por <I>C. jejuni </I>também tem sido associada a doenças auto-imunes pós-infecção incluindo, artrite e síndrome de Guillain-Barré. As aves, especialmente frangos são os principais reservatórios naturais de <I>Campylobacter </I><SPAN style="mso-bidi-font-style: italic">e a</SPAN> carne de frango tem sido o veículo mais freqüente de transmissão ao homem. Os métodos convencionais de isolamento e identificação de <I>Campylobacter </I>em alimentos utilizam meios de enriquecimento seletivo com posterior subcultivo em meios sólidos seletivos, seguindo-se a realização de testes bioquímicos e sorológicos. Devido à rapidez, especificidade e sensibilidade, métodos moleculares, como a reação em cadeia da polimerase (PCR), têm sido padronizados para detecção e identificação de <I>Campylobacter </I>em alimentos. No entanto, necessitam de eletroforese em gel agarose para detecção do produto, demandando tempo e mão-de-obra, além de apresentar interpretação subjetiva em alguns casos. Por essa razão, métodos baseados em PCR em tempo real estão sendo desenvolvidos e propostos para o diagnóstico rápido e sensível da presença de <I style="mso-bidi-font-style: normal">Campylobacter</I> spp em diversos alimentos. O objetivo deste trabalho foi detectar <I>C. jejuni</I> em amostras de carne de frango comercializadas em Londrina/PR utilizando ensaio PCR em tempo real. Amostras de 10 g de pele de frango foram homogeneizadas e enriquecidas em caldo Bolton suplementado por 48 h sob microaerofilia e, em seguida, alíquotas de 1 mL das culturas enriquecidas foram submetidas à extração de DNA por fervura. As reações de amplificação da PCR em tempo real foram realizadas em duplicata em um volume final de 50 &#956;L contendo: 25 &#956;L de Platinum SYBR Green </SPAN><SPAN lang=PT style="FONT-SIZE: 10pt; LINE-HEIGHT: 150%; FONT-FAMILY: 'Arial','sans-serif'; mso-ansi-language: PT">(Invitrogen)</SPAN><SPAN style="FONT-SIZE: 10pt; LINE-HEIGHT: 150%; FONT-FAMILY: 'Arial','sans-serif'">, 400 nmol </SPAN><SPAN lang=PT style="FONT-SIZE: 10pt; LINE-HEIGHT: 150%; FONT-FAMILY: 'Arial','sans-serif'; mso-bidi-font-weight: bold; mso-ansi-language: PT">do par de iniciadores </SPAN><I style="mso-bidi-font-style: normal"><SPAN style="FONT-SIZE: 10pt; LINE-HEIGHT: 150%; FONT-FAMILY: 'Arial','sans-serif'">map</SPAN></I><SPAN style="FONT-SIZE: 10pt; LINE-HEIGHT: 150%; FONT-FAMILY: 'Arial','sans-serif'; mso-bidi-font-style: italic">A e 100 nmol de DNA. Dentre os resultados, podem ser destacados: i) o</SPAN><SPAN lang=PT style="FONT-SIZE: 10pt; LINE-HEIGHT: 150%; FONT-FAMILY: 'Arial','sans-serif'; mso-ansi-language: PT"> par de iniciadores <I style="mso-bidi-font-style: normal">mapA</I> permitiu detectar e identificar <I style="mso-bidi-font-style: normal">C. jejuni</I> em amostras de carnes de frango ii) t</SPAN><SPAN style="FONT-SIZE: 10pt; LINE-HEIGHT: 150%; FONT-FAMILY: 'Arial','sans-serif'; mso-bidi-font-style: italic">odas as </SPAN><SPAN lang=PT style="FONT-SIZE: 10pt; LINE-HEIGHT: 150%; FONT-FAMILY: 'Arial','sans-serif'; mso-ansi-language: PT">amostras de carcaças de frangos adquiridas no comércio de Londrina e</SPAN><SPAN style="FONT-SIZE: 10pt; LINE-HEIGHT: 150%; FONT-FAMILY: 'Arial','sans-serif'">stavam contaminadas com <I style="mso-bidi-font-style: normal">C. jejuni</I>; iii) o</SPAN><SPAN lang=PT style="FONT-SIZE: 10pt; LINE-HEIGHT: 150%; FONT-FAMILY: 'Arial','sans-serif'; mso-ansi-language: PT"> tempo necessário para a obtenção dos resultados foi 48 horas. Estes, entre outros resultados obtidos neste trabalho, representam um avanço no diagnóstico de <I style="mso-bidi-font-style: normal">Campylobacter </I>spp. em comparação com os métodos tradiocionais, cujo tempo médio para confirmar um resultado positivo é cerca de 6 a 7 dias.</SPAN><SPAN style="FONT-SIZE: 10pt; LINE-HEIGHT: 150%; FONT-FAMILY: 'Arial','sans-serif'"><?xml:namespace prefix = o ns = "urn:schemas-microsoft-com:office:office" /><o:p></o:p></SPAN></P></font></p><br><b>Palavras-chave: </b>&nbsp;Campylobacter jejuni, Carcaças de Frango, PCR em Tempo Real</td></tr></table></tr></td></table></body></html>