25º Congresso Brasileiro de Microbiologia

25º Congresso Brasileiro de Microbiologia

ResumoID:802-2

Área: Micobacteriologa ( Divisão C )

IDENTIFICAÇÃO DE MICOBACTÉRIAS PELO PRA-PCR EM UM LABORATÓRIO DE ROTINA DE UM HOSPITAL GERAL

Eliane Picoli Alves Bensi (UNICAMP); Alessandra Costa Panunto (UNICAMP); Patricia Costa Panunto (UNICAMP); Priscila Dentini (UNICAMP); Marcelo de Carvalho Ramos (UNICAMP)

Resumo

Introdução: A identificação de micobactérias isoladas de espécimes biológicos utilizando-se métodos tradicionais é demorada e trabalhosa. Por possuírem crescimento lento, os testes bioquímicos necessários à sua caracterização são prolongados. Em contrapartida, a definição rápida de que a micobactérias, que eventualmente cresce de um material recolhido de doente com suspeita de tuberculose, é do complexo M.tuberculosis ou não, tem importância fundamental para o tratamento. Embora as maiorias das doenças humanas produzidas por micobactérias são provocadas pelo M.tuberculosis, outras micobactérias têm sido responsáveis por casos de pneumonias, infecções de partes moles e outras associadas a atos cirúrgicos, principalmente em pacientes imunodeprimidos. Existem, também, casos de isolamento de micobactérias em secreção pulmonar, por exemplo, que não têm significado clínico, como os de M.gordonae. Os métodos genético-moleculares de identificação têm ganhado importância na prática laboratorial, por serem rápidos e suficientemente precisos. No caso das micobactérias, a PCR, seguida de restrição enzimática do amplificado (PRA-PCR) tem sido praticada com sucesso. Em laboratórios de rotina, entretanto, essa técnica ainda não tem sido largamente empregada.

਀㰀倀猀琀礀氀攀㴀∀吀䔀堀吀ⴀ䄀䰀䤀䜀一㨀樀甀猀琀椀昀礀㬀䴀䄀刀䜀䤀一㨀　挀洀　挀洀　瀀琀∀ 挀氀愀猀猀㴀䴀猀漀一漀爀洀愀氀㸀㰀䈀㸀㰀匀倀䄀一猀琀礀氀攀㴀∀䘀伀一吀ⴀ匀䤀娀䔀㨀㄀㄀瀀琀㬀洀猀漀ⴀ戀椀搀椀ⴀ昀漀渀琀ⴀ猀椀稀攀㨀㄀㈀⸀　瀀琀∀㸀☀渀戀猀瀀㬀㰀漀㨀瀀㸀㰀⼀漀㨀瀀㸀㰀⼀匀倀䄀一㸀㰀⼀䈀㸀㰀⼀倀㸀

Objetivos: Aplicar a técnica de PRA-PCR em linhagens de micobactérias isoladas de pacientes internados e atendidos em ambulatório de um hospital geral (HC/UNICAMP), em um laboratório de rotina de micobacterias.

਀㰀倀猀琀礀氀攀㴀∀吀䔀堀吀ⴀ䄀䰀䤀䜀一㨀樀甀猀琀椀昀礀㬀䴀䄀刀䜀䤀一㨀　挀洀　挀洀　瀀琀∀ 挀氀愀猀猀㴀䴀猀漀一漀爀洀愀氀㸀㰀匀倀䄀一猀琀礀氀攀㴀∀䘀伀一吀ⴀ匀䤀娀䔀㨀㄀㄀瀀琀㬀洀猀漀ⴀ戀椀搀椀ⴀ昀漀渀琀ⴀ猀椀稀攀㨀㄀㈀⸀　瀀琀∀㸀☀渀戀猀瀀㬀㰀漀㨀瀀㸀㰀⼀漀㨀瀀㸀㰀⼀匀倀䄀一㸀㰀⼀倀㸀

Material e Métodos: As linhagens examinadas (120) foram isoladas em equipamento semi-automatizado MB/BacT (Organon). Depois de verificado o crescimento em meio 7H9 enriquecido, essas linhagens foram reinoculadas em meio sólido (Lowenstein-Jensen). O DNA foi extraído por aquecimento e resfriamento, submetido à amplificação utilizando primers para a seqüência do gene hsp65 e o amplificado foi submetido à restrição enzimática com as enzimas BstEII e Hae III . Os padrões de restrição foram comparados com os do PRASITE para a identificação ao nível de espécie.

Resultados: Das 120 linhagens examinadas, obtivemos identificação conclusiva em 115 casos. A maioria delas (91) foi caracterizada como do Complexo M.tuberculosis (CMTB). As restantes, 12 foram M.gordonae, 6 M. avium, 1 M. fortuitum, 1 M. chelonae, 2 M. abscessus, 1 M. intracellulare, 1 M. szulgai. Em dois casos a identificação ao nível de espécie não foi possível, entretanto tratava-se de micobactérias não tuberculosas.

Conclusão: O PRA-PCR é um método rápido e sensível de identificação de espécies de micobacterias e pode ser utilizado em laboratórios de rotina de micobactérias.

Palavras-chave: Mycobacterium tuberculosis, micobactérias não tuberculosas, PRA-PCR, identificação

਀�