ÿþ<HTML><HEAD><TITLE>25º Congresso Brasileiro de Microbiologia </TITLE><link rel=STYLESHEET type=text/css href=css.css></HEAD><BODY aLink=#ff0000 bgColor=#FFFFFF leftMargin=0 link=#000000 text=#000000 topMargin=0 vLink=#000000 marginheight=0 marginwidth=0><table align=center width=700 cellpadding=0 cellspacing=0><tr><td align=left bgcolor=#cccccc valign=top width=550><font face=arial size=2><strong><font face=Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif size=3><font size=1>25º Congresso Brasileiro de Microbiologia </font></font></strong><font face=Verdana size=1><b><br></b></font><font face=Verdana, Arial,Helvetica, sans-serif size=1><strong> </strong></font></font></td><td align=right bgcolor=#cccccc valign=top width=150><font face=arial size=2><strong><font face=Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif size=1><font size=1>ResumoID:420-1</font></em></font></strong></font></td></tr><tr><td colspan=2><br><br><table align=center width=700><tr><td>Área: <b>Microbiologia Geral ( Divisão H )</b><p align=justify><strong> <FONT SIZE="2">AVALIAÇÃO DO PAPEL DE BOMBAS DE EFLUXO NA RESISTÊNCIA A CLINDAMICINA E OUTROS ANTIMICROBIANOS EM CEPAS DE <SPAN STYLE="FONT-STYLE: ITALIC;">BACTEROIDES FRAGILIS</SPAN></FONT> </strong></p><p align=justify><b><u>Renata Ferreira Boente </u></b> (<i>UFRJ</i>); <b>Joaquim dos Santos-filho </b> (<i>UFRJ</i>); <b>Eliane de Oliveira Ferreira </b> (<i>UFRJ</i>); <b>Geraldo Renato de Paula </b> (<i>UFF</i>); <b>Regina Maria Cavalcanti Pilotto Domingues </b> (<i>UFRJ</i>)<br><br></p><b><font size=2>Resumo</font></b><p align=justify class=tres><font size=2> <link rel="File-List" href="file:///C:/DOCUME%7E1/RENATA%7E1/CONFIG%7E1/Temp/msoclip1/01/clip_filelist.xml"><!--[if gte mso 9]><xml> <w:WordDocument> <w:View>Normal</w:View> <w:Zoom>0</w:Zoom> <w:HyphenationZone>21</w:HyphenationZone> <w:DoNotOptimizeForBrowser/> </w:WordDocument> </xml><![endif]--><style> <!-- /* Style Definitions */ p.MsoNormal, li.MsoNormal, div.MsoNormal {mso-style-parent:""; margin:0cm; margin-bottom:.0001pt; mso-pagination:widow-orphan; font-size:10.0pt; font-family:"Times New Roman"; mso-fareast-font-family:"Times New Roman";} h1 {mso-style-next:Normal; margin:0cm; margin-bottom:.0001pt; text-align:justify; mso-pagination:widow-orphan; page-break-after:avoid; mso-outline-level:1; font-size:12.0pt; mso-bidi-font-size:10.0pt; font-family:"Times New Roman"; mso-font-kerning:0pt; font-weight:normal;} @page Section1 {size:612.0pt 792.0pt; margin:70.85pt 3.0cm 70.85pt 3.0cm; mso-header-margin:36.0pt; mso-footer-margin:36.0pt; mso-paper-source:0;} div.Section1 {page:Section1;} --></style><link rel="File-List" href="file:///C:/DOCUME%7E1/RENATA%7E1/CONFIG%7E1/Temp/msoclip1/01/clip_filelist.xml"><!--[if gte mso 9]><xml> <w:WordDocument> <w:View>Normal</w:View> <w:Zoom>0</w:Zoom> <w:HyphenationZone>21</w:HyphenationZone> <w:DoNotOptimizeForBrowser/> </w:WordDocument> </xml><![endif]--><style> <!-- /* Style Definitions */ p.MsoNormal, li.MsoNormal, div.MsoNormal {mso-style-parent:""; margin:0cm; margin-bottom:.0001pt; mso-pagination:widow-orphan; font-size:10.0pt; font-family:"Times New Roman"; mso-fareast-font-family:"Times New Roman";} h1 {mso-style-next:Normal; margin:0cm; margin-bottom:.0001pt; text-align:justify; mso-pagination:widow-orphan; page-break-after:avoid; mso-outline-level:1; font-size:12.0pt; mso-bidi-font-size:10.0pt; font-family:"Times New Roman"; mso-font-kerning:0pt; font-weight:normal;} @page Section1 {size:21.0cm 842.0pt; margin:3.0cm 3.0cm 3.0cm 3.0cm; mso-header-margin:36.0pt; mso-footer-margin:36.0pt; mso-paper-source:0;} div.Section1 {page:Section1;} --> </style> <p class="MsoNormal" style="text-align: justify; font-family: Times New Roman,Times,serif;"><font size="3"><span style="font-size: 12pt;">A clindamicina é um dos antimicrobianos de escolha no tratamento de infecções causadas por anaeróbios. Porém, a problemática da resistência a este antimicrobiano, principalmente por cepas pertencentes à espécie <i style="">Bacteroides fragilis</i>, tem limitado o uso deste antimicrobiano na terapia empírica de infecções onde há suspeita do envolvimento deste grupo microbiano. O gene <i style="">erm</i>F responsável pela resistência a clindamicina na espécie muitas vezes não é detectado por PCR ou técnicas de hibridação em cepas resistentes, parecendo não estar circulante no país. Dessa forma, o objetivo deste estudo é explicar o mecanismo de resistência a clindamicina na ausência do gene de resistência <i style="">erm</i>F e de outros genes relacionados<i style="">.</i> Foi previamente descrito em <i style="">B. fragilis</i>, a presença de 16 operons homólogos ao operon MexAB-OprM de <i style="">Pseudomonas aeruginosa </i><span style=""><span style="">&nbsp;</span>denominado </span><i style="">bme</i>ABC<span style="">1-16</span>. Com bases nesses dados foi realizada uma triagem com cepas resistentes (CIM de 8 a &gt;256 mg/L) e sensíveis (CIM de 0,5 a 4 mg/L) através de ensaios de PCR para detecção do gene <i style="">bme</i>B3, codificador de uma proteína transportadora do operon <i style="">bme</i>ABC3, utilizando iniciadores específicos. Dentre as 33 cepas estudadas, 88% das cepas sensíveis e 75% das resistentes apresentaram o referido gene. Apesar da presença do gene <i style="">bme</i>B3, referido como o gene principal relacionado à resistência, ainda não foi possível elucidar seu papel na resistência a clindamicina. Uma sonda foi confeccionada a partir do gene <i style="">bme</i>B3 da cepa de <i>B. fragilis</i> ATCC 25285 utilizada em ensaios de <i style="">Southern Blotting</i> para determinação do número de cópias do referido gene nessas cepas. Paralelamente, está sendo desenvolvido um protocolo de extração de RNA para ensaios de RT-PCR com intuito de verificar diferenças na expressão de bombas de efluxo em cepas positivas para o gene <i style="">bme</i>B3 na presença e ausência de clindamicina. Em seguida, serão realizados testes fenotípicos utilizando inibidores de bombas de efluxo para determinar o envolvimento dessas bombas na resistência a clindamicina. Serão ainda selecionadas cepas para ensaios de clonagem do gene <i style="">bme</i>B em <i style="">Escherichia coli</i>, para posterior sequênciamento e comparação das sequências apresentadas em cepas susceptíveis e resistentes para determinar a interferência da sequência gênica no perfil de susceptibilidade a clindamicina. A região <i style="">upstream</i> do <i>operon</i> <i style="">bme</i>ABC, referida como região reguladora do <i>operon</i>, de cepas sensíveis e resistentes selecionadas será analisada através da confecção de iniciadores e construção de mutantes complementares para verificar a associação entre mutações nessa região e o perfil apresentado por estas cepas. A possibilidade de associação de bombas de efluxo a resistência a clindamicina poderá auxiliar a compreensão da evolução deste fenômeno.<o:p></o:p></span></font></p> <h1 style="font-family: Times New Roman,Times,serif;"><font size="3">Apoio financeiro: MCT/CNPq, MCT/PRONEX/FAPERJ, Faperj</font></h1> </font></p><br><b>Palavras-chave: </b>&nbsp;Bacteroides fragilis, Bombas de efluxo, Clindamicina, Expressão gênica, Resistência</td></tr></table></tr></td></table></body></html>