ÿþ<HTML><HEAD><TITLE>25º Congresso Brasileiro de Microbiologia </TITLE><link rel=STYLESHEET type=text/css href=css.css></HEAD><BODY aLink=#ff0000 bgColor=#FFFFFF leftMargin=0 link=#000000 text=#000000 topMargin=0 vLink=#000000 marginheight=0 marginwidth=0><table align=center width=700 cellpadding=0 cellspacing=0><tr><td align=left bgcolor=#cccccc valign=top width=550><font face=arial size=2><strong><font face=Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif size=3><font size=1>25º Congresso Brasileiro de Microbiologia </font></font></strong><font face=Verdana size=1><b><br></b></font><font face=Verdana, Arial,Helvetica, sans-serif size=1><strong> </strong></font></font></td><td align=right bgcolor=#cccccc valign=top width=150><font face=arial size=2><strong><font face=Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif size=1><font size=1>ResumoID:412-2</font></em></font></strong></font></td></tr><tr><td colspan=2><br><br><table align=center width=700><tr><td>Área: <b>Patogenicidade Microbiana ( Divisão D )</b><p align=justify><strong> <FONT SIZE="4"><FONT FACE="TIMES NEW ROMAN, TIMES, SERIF">CARACTERIZAÇÃO MOLECULAR DE UMA PROTEÍNA LIGADORA A FIBRONECTINA PLASMÁTICA EM&NBSP;<I><B>BACTEROIDES FRAGILIS</B></I></FONT></FONT> </strong></p><p align=justify><b><u>Heidi Pauer </u></b> (<i>UFRJ</i>); <b>Joaquim dos Santos-filho </b> (<i>UFRJ</i>); <b>Eliane de Oliveira Ferreira </b> (<i>UFRJ</i>); <b>Regina Maria Cavalcanti Pilotto Domingues </b> (<i>UFRJ</i>)<br><br></p><b><font size=2>Resumo</font></b><p align=justify class=tres><font size=2> <p align="justify">&nbsp;<font size="4">A aderência bacteriana a células e moléculas do hospedeiro é um importante processo para a colonização e sobrevivência destes micro-organismos. <i>Bacteroides fragilis</i> é uma bactéria Gram-negativa, anaeróbia estrita, frequentemente isolada de processos infecciosos, como infecções intra-abdominais e bacteriemias. </font><font size="4" color="#000000">Esta bactéria expressa diversas adesinas, sendo que algumas são capazes reconhecer com</font><font size="4">ponentes da matriz extracelular, inclusive a fibronectina plasmática.</font><font size="4" color="#000000"> Uma das m</font><font size="4">oléculas responsáveis por essa aderência é uma proteína de membrana externa dependente de TonB, recentemente descrita por nosso grupo. Sendo assim, o objetivo deste estudo é detectar em cepas de <i>B. fragilis</i> a presença do gene codificador desta proteína e iniciar sua caracterização molecular. Para realizar este estudo foram selecionadas 20 cepas de <i>B. fragilis</i> isoladas de quadro de bacteriemia e da microbiota normal. Inicialmente foram desenh</font><font size="4" color="#000000">adas seque</font><font size="4">ncias iniciadoras a partir da sequencia do gene depositada em um banco de dado</font><font size="4" color="#000000">s (</font><font size="4" color="#000000"><span lang="">EMBL/</span></font><font size="4" color="#000000"><span lang=""><i>GenBank</i></span></font><font size="4" color="#000000"><span lang="">)</span></font><font size="4" color="#000000">. Das cepas sele</font><font size="4" color="#000000"><span style="background: transparent none repeat scroll 0% 0%; -moz-background-clip: -moz-initial; -moz-background-origin: -moz-initial; -moz-background-inline-policy: -moz-initial;">cionadas foi realizada a extração de D</span></font><font size="4" color="#000000">NA pelo método de tiacianato de guanidina e a presença do gene foi detectada através da PCR. Em todas as cepas analisadas foi confirmada a presença do gene responsável pela expressão da proteína dependente de TonB. Em seguida, este gene foi clonado nos sítios das enzimas de restrição </font><font size="4" color="#000000"><i>Xho</i></font><font size="4" color="#000000">I/</font><font size="4" color="#000000"><i>Nde</i></font><font size="4" color="#000000">I do vetor de expressão pET26b+ para construção de uma proteína recombinante </font><font size="4" color="#000000"><span lang="">Adhesina-His-tag (Ads-6xHis). A ligação foi transformada para célula competente de </span></font><font size="4" color="#000000"><span lang=""><i>E. coli</i></span></font><font size="4" color="#000000"><span lang=""> DH</span></font><font size="4" color="#000000">10B para confirmação da inserção do fragmento. Para avaliarmos o envolvimento desta proteína na ligação a proteína plasmática, o </font><font size="4" color="#000000"><span lang="">pET26b+/</span></font><font size="4" color="#000000"><span lang=""><i>Ads-6xHis</i></span></font><font size="4" color="#000000"><span lang=""> foi trasnformado para célula de expressão d</span></font><font size="4" color="#000000">a cepa de </font><font size="4" color="#000000"><i>E. coli</i></font><font size="4" color="#000000"> (Rosetta) para sua purificação e </font><font size="4" color="#000000">utilização em ensaios de adesão e inibição e produção de anticorpos policlonais. </font><font size="4">Através destes experimentos esperamos obter um melhor entendimento sobre o real papel desta proteína na interação do <i>B. fragilis</i> com o hospedeiro humano.</font></p> <p align="justify"><font size="4"><span style="background: transparent none repeat scroll 0% 0%; -moz-background-clip: -moz-initial; -moz-background-origin: -moz-initial; -moz-background-inline-policy: -moz-initial;">Apoio financeiro: CNPq, Faperj, Pronex-Faperj, CAPES</span></font></p> </font></p><br><b>Palavras-chave: </b>&nbsp;Bacteroides fragilis, Fibronectina plasmática, Proteína de membrana externa</td></tr></table></tr></td></table></body></html>