ÿþ<HTML><HEAD><TITLE>25º Congresso Brasileiro de Microbiologia </TITLE><link rel=STYLESHEET type=text/css href=css.css></HEAD><BODY aLink=#ff0000 bgColor=#FFFFFF leftMargin=0 link=#000000 text=#000000 topMargin=0 vLink=#000000 marginheight=0 marginwidth=0><table align=center width=700 cellpadding=0 cellspacing=0><tr><td align=left bgcolor=#cccccc valign=top width=550><font face=arial size=2><strong><font face=Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif size=3><font size=1>25º Congresso Brasileiro de Microbiologia </font></font></strong><font face=Verdana size=1><b><br></b></font><font face=Verdana, Arial,Helvetica, sans-serif size=1><strong> </strong></font></font></td><td align=right bgcolor=#cccccc valign=top width=150><font face=arial size=2><strong><font face=Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif size=1><font size=1>ResumoID:336-2</font></em></font></strong></font></td></tr><tr><td colspan=2><br><br><table align=center width=700><tr><td>Área: <b>Microbiologia Veterinária ( Divisão G )</b><p align=justify><strong>CINÉTICA DE ADERÊNCIA E ACÚMULO DE MRNA PARA IL-8 EM CÉLULAS HELA INFECTADAS POR <EM>CAMPYLOBACTER FETUS</EM> SUBSP.<EM> VENEREALIS</EM> SEQUENCIALMENTE INOCULADAS E REISOLADAS DE NOVILHAS VIREGENS.</strong></p><p align=justify><b><u>Ana Paula Reinato Stynen </u></b> (<i>UFMG</i>); <b>Telma Maria Alves </b> (<i>UFMG</i>); <b>Juliana Pinto da Silva Mol </b> (<i>UFMG</i>); <b>Ana Claudia Pinto Cottorello </b> (<i>MAPA/Lanagro MG</i>); <b>Andrey Pereira Lage </b> (<i>MAPA/Lanagro MG</i>)<br><br></p><b><font size=2>Resumo</font></b><p align=justify class=tres><font size=2><P class=MsoNormal style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt; LINE-HEIGHT: normal; TEXT-ALIGN: justify; mso-layout-grid-align: none; mso-pagination: none"><SPAN style="FONT-SIZE: 12pt; FONT-FAMILY: 'Times New Roman'">infecção do trato genital de fêmeas bovinas pelo <I>C. fetus subsp. venerealis </I>(<I>Cfv</I>) resulta em endometrite que cria um ambiente desfavorável à implantação e ao desenvolvimento do embrião. Um dos primeiros passos para o estabelecimento de uma infecção é a ligação do microrganismo à célula do hospedeiro que inicia os processos de sinalização celular, desencadeando a resposta imune do hospedeiro. Os objetivos deste estudo foram avaliar a cinética de aderência e o acúmulo de mRNA para IL-8 <?xml:namespace prefix = st1 ns = "urn:schemas-microsoft-com:office:smarttags" /><st1:PersonName w:st="on" ProductID="em células HeLa">em células HeLa</st1:PersonName> infectadas por <I>Cfv</I> sequencialmente inoculadas e reisoladas de novilhas virgens. <I>Cfv</I> NCTC10354 foi inoculada em novilha virgem, no estro, por via vaginal. Sete dias <SPAN style="COLOR: black">após a inoculação, foi isolada do muco cervical a amostra P1, que foi utilizada como desafio para infecção vaginal de outra novilha. Após nove dias de infecção foi isolada do útero deste animal a amostra P2, que foi inoculada intravaginalmente <st1:PersonName w:st="on" ProductID="em novilha. A">em novilha. A</st1:PersonName> amostra P3 foi isolada do muco cervical da terceira novilha 14 dias após a infecção. Para o ensaio de aderência foi realizado o protocolo de gentamicina</SPAN>, utilizando células HeLa (2,2x10<SUP>5</SUP> células) em placas de 48 poços e para cinética de IL-8 foram utilizadas placas de 6 poços (1,2x10<SUP>6 </SUP>células).<SPAN style="mso-spacerun: yes">&nbsp; </SPAN>As células HeLa<SPAN style="mso-spacerun: yes">&nbsp; </SPAN>foram inoculadas com suspensões de <I>Cfv</I> NCTC10354, P2 e P3<I>,</I> na multiplicidade de infecção de 500 bactérias/célula,<I> </I>e incubadas por 30 min, 2h, 8h, 12h e 18h para IL-8 e<SPAN style="mso-spacerun: yes">&nbsp; </SPAN>30, 60, 90, 120, 150 e 180 min para ensaio de aderência. Após a incubação foi realizada a extração de mRNA e confecção do cDNA. A determinação dos níveis de acúmulo de mRNA para IL-8 foi realizada por qRT PCR em tempo real. Os resultados foram analisados quantitativamente após normalização baseada na expressão de GAPDH. A percentagem de aderência de cada amostra foi calculada utilizando as contagens bacterianas do inóculo e dos poços sem gentamicina. A variação do acúmulo de mRNA para IL-8 <st1:PersonName w:st="on" ProductID="em células HeLa">em células HeLa</st1:PersonName> infectadas com as amostras <I>Cfv </I>NCTC10354, P2 e P3 mostra o mesmo padrão com expressão a partir dos 30 min e pico às 12h. Entretanto, o acúmulo de mRNA IL-8 na amostra P3 foi desde o início significativamente superior ao encontrado nas células infectadas pela amostra <I>Cfv</I> NCTC10354. As amostras mostraram uma cinética de aderência semelhante já aos 30 min e a amostra P3, apresentou valores percentuais de aderência superiores à amostra NCTC10354 na maioria dos tempos testados.<?xml:namespace prefix = o ns = "urn:schemas-microsoft-com:office:office" /><o:p></o:p></SPAN></P> <P class=MsoNormal style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt; LINE-HEIGHT: normal; mso-layout-grid-align: none; mso-pagination: none"><B><SPAN style="FONT-FAMILY: 'Times New Roman'"><o:p>&nbsp;</o:p></SPAN></B></P> <P class=MsoNormal style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt; LINE-HEIGHT: normal; mso-layout-grid-align: none; mso-pagination: none"><B><SPAN style="FONT-FAMILY: 'Times New Roman'">Palavras-chave: </SPAN></B><SPAN style="FONT-FAMILY: 'Times New Roman'">IL-8, aderência, patogenia, campilobacteriose genital bovina<B><o:p></o:p></B></SPAN></P> <P class=MsoNormal style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt; LINE-HEIGHT: normal; mso-layout-grid-align: none; mso-pagination: none"><SPAN style="FONT-FAMILY: 'Times New Roman'"><o:p>&nbsp;</o:p></SPAN></P> <P class=MsoNormal style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt; LINE-HEIGHT: normal; mso-layout-grid-align: none; mso-pagination: none"><B><SPAN style="FONT-FAMILY: 'Times New Roman'">Agradecimentos</SPAN></B><SPAN style="FONT-FAMILY: 'Times New Roman'">: Fapemig, CNPq, FEP MVZ Coordenação Preventiva<o:p></o:p></SPAN></P></font></p><br><b>Palavras-chave: </b>&nbsp;Aderência, Campilobacteriose Genital Bovina, IL-8, Patogenia</td></tr></table></tr></td></table></body></html>