25º Congresso Brasileiro de Microbiologia

25º Congresso Brasileiro de Microbiologia

ResumoID:336-1

Área: Microbiologia Veterinária ( Divisão G )

IDENTIFICAÇÃO POR ESPECTOMETRIA DE MASSA DE PROTEÍNAS DE CAMPYLOBACTER FETUS SUBSP. VENEREALIS DIFERENCIALMENTE EXPRESSAS ANTES E APÓS INFECÇÃO EM NOVILHAS.

Ana Paula Reinato Stynen (UFMG); Ludmila Rodrigues Pinto Ferreira (Unifesp); Janete Chung (Unifesp); Telma Maria Alves (UFMG); Sergio Schenkman (Unifesp); Andrey Pereira Lage (UFMG)

Resumo

A campilobacteriose genital bovina é uma doença sexualmente transmissível caracterizada por infertilidade temporária e ocasionalmente abortos. Tem um grande impacto em países como o Brasil, que possui grandes rebanhos utilizando monta natural. A fim de identificar proteínas diferencialmente expressas por amostras de Campylobacter fetus subsp venerealis após infecção em novilhas virgens, as amostras foram analisadas por eletroforese bidimensional e espectrometria de massa. A amostra de referência de Campylobacter fetus subsp. venerealis NCTC 10354, aqui denominada P1, foi inoculada em uma novilha virgem, e após sete dias de infecção, foi isolada de muco cérvico-vaginal a amostra denominada P2. A amostra P2 foi então inoculada em outra novilha virgem e duas semanas após a infecção experimental a amostra P3 foi isolada do muco cérvico-vaginal. A focalização isoelétrica de proteínas foi efetuada com tiras IPG de 18 cm, com o pH variando de 3 a 11. Após a focalização, a separação da segunda dimensão foi realizada em aparelho vertical a 30mA por eletroforese em gel. As imagens foram analisadas por uma combinação de detecção automática de spots feita pelo programa e detecção manual. Dos 90 spots selecionados para análise, 30 apresentaram valores acima do limite estabelecido pelo programa e, foram identificados sem erro. Os spots escolhidos nos géis foram cortados e submetidos à espectrometria de massa utilizando um espectrômetro de massa tipo quadrupolo íon-trap. Todas as informações obtidas para cada spot foram utilizadas para busca nas bases de dados de proteínas disponíveis de Campylobacter jejuni e Campylobacter fetus subsp.fetus depositadas no NCBI. Modificações no perfil de expressão protéica foram observadas entre C. fetus subsp. venerealis antes e depois da passagem em novilhas. Proteínas envolvidas na patogênese, e que apresentaram expressão aumentada após múltiplas passagens em novilhas incluem: Purine Binding Chemotaxis (Chew), Flagelar Hook Associated, Possible Lipoprotein Methil accepting chemotaxisis, outras proteínas, principalmente relacionadas ao metabolismo foram também encontradas aumentadas e identificadas: Biotin carboxilase Molebdenum cofactor, 3-deoxi mano octulosanate, glutamil T RNA reductase, Phosphogluosaminase mutase.

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Palavras-chave: Campylobacter fetus venerealis, espectometria de massas, gel bi-dimensional, proteoma

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