PROSPECÇÃO DE ENZIMAS DE INTERESSE BIOTECNOLÓGICO DE VIBRIOS ASSOCIADOS A CORAIS ENDÊMICOS BRASILEIROS.

Maíra Pompeu Martins (UCB); Thaís Lemos (UCB); Ricardo Henrique Kruger (UnB)

A necessidade de novos metabólitos capazes de aumentar o rendimento no setor industrial, reduzindo tempo de processo e custos, vem instigando a busca por novas enzimas. Com esse propósito, a biotecnologia tem se voltado para a obtenção de tais biomoléculas, partindo de diversas fontes tais como animais, vegetais e microrganismos. Sendo o meio marinho ambiente com condições extremas de pressão, salinidade e disponibilidade de nutrientes, enzimas isoladas dos microrganismos que ali habitam tendem a possuir características bioquímicas distintas, que os permitiram adaptar e desenvolver em tais condições. Dentre os organismos do ambiente marinho, membros do gênero Vibrio têm apresentado relevante importância na obtenção de enzimas. Partindo da análise do DNA genômico de duas espécies de vibrios, Vibrio harveyi e Vibrio alginolyticus, isolados de corais endêmicos na costa brasileira, bibliotecas de clones (Genômica funcional) que possibilitam o estudo de expressão e caracterização de genes de importância na área de pesquisa e na àrea aplicada foram construídas. Duas bibliotecas de pequenos fragmentos de DNA (menores que 15kb) foram construídas, uma com V. harveyi e outra com V. alginolyticus, e uma biblioteca de grandes fragmentos de DNA (maiores que 30kb) foi construída com V. harveyi. Para a construção das bibliotecas, o DNA genômico foi fragmentado por ação de enzimas de restrição e ligado em vetores de expressão, formando assim uma coleção com vários clones representativos de cada fragmento de DNA. Estes clones foram então utilizados na busca por diferentes atividades enzimáticas. Até o momento, das bibliotecas de pequenos fragmentos de DNA, foram isolados 12 clones positivos para atividade proteolítica, 26 para atividade amilolítica e 28 para atividade lipolítica de V. harveyi, e de V. alginolyticus, 17 clones positivos para atividade lipolítica e 4 clones positivos para atividade proteolítica. Dois clones com atividade proteolítica foram isolados da biblioteca de grandes fragmentos de DNA de V. harveyi. Um clone positivo com atividade lipolítica isolado da biblioteca de pequenos fragmentos de DNA de V. alginolyticus está sendo caracterizado quanto às propriedades fisico-químicas da enzima, e está também sendo totalmente sequenciado, na busca por identificar e sub-clonar os genes contendo a atividade em vetores mais apropriados para super-expressão.