| Congresso Brasileiro de Microbiologia 2023 | Resumo: 1306-2 | ||||
Resumo:Lipossomas são vesículas, 1 a 1000 nanômetros de diâmetro, constituídas de uma ou mais camadas fosfolipídicas orientadas concentricamente em torno de um compartimento aquoso e servem como carreadores de fármacos ou biomoléculas. Proteínas ou peptídeos encapsulados em lipossomas ou associados à sua superfície estão sendo utilizados para aplicação em imunoterapias e vacinas devido o potencial adjuvante destas vesículas. Este trabalho teve como objetivo produzir e caracterizar lipossomas vazios (Lv) e contendo as proteínas recombinantes Spike (LrSp) ou a nucleoproteína (LrNp) de SARS-CoV-2 quanto às propriedades físico-químicas e biológicas. Os lipossomas foram constituídos por fosfatidilcolina de soja, colesterol e diestearoilfosfatidiletanolamina-polietilenoglicol 2000, utilizando o método de formação de filme. Este foi hidratado em tampão salina pH 7,5 contendo 30 µg/mL das proteínas S ou N recombinantes. As soluções foram homogeneizadas em vórtex e dispersos em banho de ultrassom. Por fim, elas passaram por 15 ciclos de extrusões através de membrana de policarbonato de 0,4 µm. Foram realizadas análises físico-químicas para medir o potencial zeta (ZP), índice de polidispersão (PDI) e diâmetro hidrodinâmico dos lipossomas, usando espalhamento dinâmico de luz. A eficiência de encapsulação (EE) das proteínas nas vesículas lipossomais foi determinada por centrifugação e quantificação das proteínas não encapsuladas. Foi avaliada a toxicidade de Lv e de duas concentrações (2,5 µg/mL e 5 µg/mL) de LrSp ou LrNp em células de linhagem RAW246.7 por 48 h. A viabilidade celular foi avaliada pelo ensaio de redução de dimetil-tiazol difenil tetrazólio. A quantificação da proteína S não encapsulada foi de 0,26 µg/mL (EE de 99,13%) e de proteína N foi de 0,15 µg/mL (EE de 99,56%). As formulações apresentaram um PDI ideal, sendo 27,1% para LrSp e 24,7% para LrNp. Além disso, não foram observadas diferenças significativas no tamanho dos lipossomas, tanto para Lv (164,10 nm), quanto para LrSp e LrNp (191,14 nm e 173,06 nm, respectivamente). Em relação ao ZP, não houve alteração da carga da superfície de LrSp e LrNp, quando comparado com Lv, permanecendo com cargas negativas. Lv, LrSp e LrNp não apresentaram toxicidade em células RAW246.7. Os resultados evidenciam a formulação de lipossomas contendo as proteínas S ou N recombinantes, com alta eficiência de encapsulação. As formulações apresentaram tamanho homogêneo, com índice de polidispersão adequado e carga superficial negativa, indicando estabilidade das partículas. Os lipossomas não demonstraram toxicidade em células. Esses achados ressaltam o potencial dessas formulações como veículos promissores para aplicações terapêuticas envolvendo proteínas recombinantes, especialmente em imunização e tratamentos específicos para doenças. Palavras-chave: vesículas, adjuvantes, imunoterapia, biomoléculas Agência de fomento:Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES), Fundação Araucária | |||||