| Congresso Brasileiro de Microbiologia 2023 | Resumo: 1168-1 | ||||
Resumo:A resistência aos antimicrobianos (ATM) demanda vigilância e metódos diagnósticos efetivos. Aqui, propomos uma versão do replica plating como alternativa a meios de cultura comerciais para seleção de BGN-RB. Padronizamos as pressões seletivas adequadas para a seleção das bactérias produtoras de AmpC, ESBL e carbapenemases; e comparamos sua performance para a detecção de ESBL frente a ágar comercial cromogênico ESBL (CESBL). Para o replica plating, inoculamos uma mistura bacteriana em uma placa com ágar MacConkey (MAC) contendo ceftriaxona (MCRO; pressão seletiva inicial). O crescimento desta placa foi replicado de forma ordenada em: uma placa inicial sem droga, uma com cefepima, uma com cefoxitina, uma com imipenem, e uma final sem droga, para controle do inóculo. A padronização da concentração dos ATM foi conduzida utilizando cepas com morfologias coloniais distintas em MAC e fenótipos de resistência conhecidos, sendo elas: K. pneumoniae produtora de ESBL, E. coli produtora de pAmpC, P. aeruginosa produtora de carbapenemase e E. coli lac- sem resistência adquirida. Foram testadas duas concentrações para cada ATM: a concentração referente ao ponto de corte da categoria resistente do CLSI para Enterobacterales e 1,5X essa primeira concentração. A menor concentração que permitiu somente o crescimento das bactérias esperadas foi a selecionada para o ensaio. Avaliamos a performance da técnica para a pesquisa de produtores de ESBL em swabs retais. Para cada swab obtido foi realizado um spot em TSA como controle do espécime clínico, e os que não apresentaram crescimento foram excluídos do estudo. Para a seleção de cepas produtoras de ESBL foram realizadas as semeaduras em MCRO e em CESBL, de forma alternada. As placas de MCRO que apresentaram crescimento foram carimbadas em MAC em toda a série da replica plating, mas somente o crescimento das placas com cefepima (16 µg/mL) (CPM16) foi considerado. Dois representantes de cada morfotipo conolonial foi selecionado para mais estudos, advindos de CPM16 e CESBL. As cepas selecionadas foram identificadas por MALDI-TOF MS; a produção de ESBL em Enterobacterales foi avaliada pelo teste de disco-aproximação e confirmadas com PCR para pesquisa dos genes blaCTX-M, blaSHV, blaGES e blaTEM; as espécies não fermentadoras da glicose foram avaliadas apenas genotipicamente para os mesmos genes. Os cálculos da sensibilidade, especificidade e valores preditivos positivo e negativo (VPP/N) foram realizados considerando a presença/ausência de crescimento em CESBL e CPM16 e confirmação da produção de ESBL fenotípica e/ou genotípicamente. Observamos que a sensibilidade em ambas as técnicas foi 100%, a especificidade foi 19% para o meio comercial e 67% para a abordagem proposta; os VPPs foram 43% e 69% e os VPNs foram 100% para ambos, respectivamente. Esses resultados refletem a riqueza de espécies obtidas pelas duas técnicas; o meio comercial possibilita o crescimento de mais espécies que, após a pesquisa da de ESBL, são confirmadas como cepas negativas, enquanto as obtidas pelo replica plating possuem maior concordância com as amostras positivas para ESBL. Além disso, o meio comercial corresponde à primeira etapa da técnica proposta; significa que as réplicas geram um resultado presuntivo para a presença, não apenas de ESBL, mas também de AmpC e carbapenemase, tornando a técnica proposta mais efetiva que o meio comercial; fundamental para a vigilância de betalactamases, sobretudo em amostras complexas. Palavras-chave: ESBL, replica plating, bacilos gram-negativos, betalactâmicos, vigilância epidemiológica Agência de fomento:CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico | |||||