| Congresso Brasileiro de Microbiologia 2023 | Resumo: 1120-1 | ||||
Resumo:Os micro-organismos desempenham um papel fundamental na qualidade e funcionalidade do solo, que é um recurso natural indispensável para a sustentabilidade da vida na Terra. Contudo, apesar da alta diversidade genética das bactérias do solo, há muitas espécies bacterianas para as quais não há nenhum isolado cultivado. É necessário melhorar as técnicas de cultivo, permitindo a recuperação dessas linhagens. Neste trabalho, aplicou-se técnicas de culturômica que consiste em cultivar uma ampla gama de micro-organismos em diversos meios de cultura e condições ambientais a partir de dados de diversidade genética da amostra, visando aumentar a probabilidade de recuperação de espécies raras ou inéditas. Sendo assim, objetivou-se o isolamento seletivo de bactérias a partir de amostras de solo da cultura de soja da região de Toledo/PR. A partir dos dados de metabarcoding de quatro coletas do solo ao longo do cultivo avaliou-se as OTU (unidade taxonômica operacional) em relação as espécies não cultivadas ou não recuperadas com técnicas simples de cultivo devido a não dominância na amostra. Com base na literatura foram definidas as condições e metodologias de isolamento: 1. meios de cultivo NA e LB suplementado com extrato de solo e vermelho de fenol, como indicador da produção de ácido; 2. meio R2A suplementado com diferentes concentrações de NaCL e estreptomicina; 3. meio complexo suplementado com micronutrientes, cultivado em anaerobiose e em aerobiose; 4. enriquecimento da amostra em meio ISP 2 e ágar Bennet, seguido do plaqueamento em diferentes concentrações de cloretos de cálcio, manganês e potássio. Para o plaqueamento foi realizada a diluição seriada das amostras de solo e as placas incubadas em 4 oC, 15 oC e 30 oC. Todos os cultivos que culminaram no isolamento ocorreram a 30 °C. Os cultivos que correspondiam às possíveis características morfológicas esperadas foram isolados, resultando em três cepas. O DNA de cada linhagem foi extraído e a região 16S sequenciada para identificação taxonômica, resultando em: uma cepa Gram-positiva e pertencente ao gênero Streptomices sp; duas cepas Gram-negativas das espécies Paenibacillus uliginis e Dyadobacter fermentains. Foram recuperadas cepas que estavam com abundância significativamente baixa no metabarcoding, um resultado interessante, uma vez que geralmente são recuperados no cultivo apenas linhagens com alta abundância. Essas cepas apresentam potencial biotecnológico e diversidade morfológica e fisiológica. Streptomices sp. é uma fonte de antimicrobianos, antioxidantes e antineoplásicos de interesse médico. Paenibacillus uliginis é capaz de produzir enzimas, degradar contaminantes e sintetizar produtos químicos. Dyadobacter fermentains apresenta resistência a antibióticos, produção de biocombustíveis e medicamentos, biorremediação e uso como organismo modelo. Apesar do baixo número de isolados, os objetivos da culturômica foram alcançados, uma vez que grupos minoritários foram recuperados e depositados na Coleção de Cultura de Micro-organismos de Importância Biotecnológica e Ambiental (CCMIBA) da Unila para futuras pesquisas. Em adição, os experimentos foram direcionados e rápidos, executados em 40 dias, sem grande necessidade de seleção e cópias de isolados, como ocorre em um processo de isolamento não seletivo.
Palavras-Chave: Metabarcoding, meios de cultivo, potencial biotecnológico.
Palavras-chave: Metabarcoding, Meios de cultivo, Potencial Biotecnológico Agência de fomento:UNILA | |||||