| Congresso Brasileiro de Microbiologia 2023 | Resumo: 1080-1 | ||||
Resumo:INTRODUÇÃO: Mycobacterium tuberculosis (Mtb) é o principal agente etiológico da doença “Tuberculose”, que atualmente é responsável por 1/3 das mortes causadas por resistência antimicrobiana, sendo indicado tratamento por cerca de 2 anos, sem nenhuma garantia de cura. O composto 1-[1-(4-chlorophenyl)-2,5-dimethyl-pyrrol-3-yl]-N-(cyclohexylmethyl)methanamine, um derivado de N-phenyl-2,5-dimethylpyrrole com modificação na posição C3 do anel pirrol, apresentou concentração inibitória mínima (CIM90) de 0,3 μg/mL contra a cepa sensível de Mtb, e já demonstrou atividade bacteriostática e intracelular contra Mtb em concentrações semelhantes à isoniazida e moxifloxacino, bem como atividade inibitória significativa em um isolado clínico multidroga-resistente (MDR). Apresentou ainda baixa toxicidade tanto in vitro, quanto in vivo em modelo larval de Galleria mellonella. Estudos computacionais indicam que um transportador de ácido micólico pode ser o seu alvo para mecanismo de ação, assim como o de seus precursores SQ109 e BM212, dois antibióticos já utilizados no tratamento da tuberculose.
OBJETIVO: Ampliar os estudos de atividade em isolados clínicos resistentes, aprofundar o conhecimento da toxicogenicidade e compreender o mecanismo de ação através do sequenciamento genômico completo (SGC) de mutantes naturalmente resistentes.
METODOLOGIA: O composto foi inicialmente submetido ao experimento de mutagenicidade com cepas de Salmonella typhimurium para avaliar se tem a capacidade de induzir mutações a nível gênico. Foram utilizadas 4 cepas com diferentes mutações que afetam a biossíntese do aminoácido histidina (His), essencial para sua proliferação em meio de cultura. O composto é considerado mutagênico quando o índice de mutação calculado é maior que 2,0. Concomitantemente, a cepa sensível de Mtb H37Rv foi semeada em placas de meio ágar 7H11 contendo o composto em 5, 10 e 20x a CIM90, em busca de mutantes resistentes para em seguida realizar a extração do DNA para SGC realizado pelo laboratório SeqCenter, em Pittsburgh - EUA. Além disso, o composto já foi testado contra dois isolados clínicos (IC) MDR e pré-XDR para ampliar o conhecimento acerca de sua atividade em cepas resistentes.
RESULTADOS E DISCUSSÃO: O ensaio de mutagenicidade foi realizado na faixa de concentração de 6,25 – 50 μg/mL, e os resultados obtidos foram IM < 2,0 e por isso consideramos ausência de potencial mutagênico. Além disso, em nenhuma das cepas analisadas foi observada uma relação dose/resposta significativa. Apenas uma colônia cresceu na placa de ágar contendo o composto em 5x a CIM90 e o sequenciamento do DNA extraído mostrou que há mutações nos genes Rv1686c e Rv2850c, que causam, respectivamente, possíveis alterações em transportadores de membrana da família ABC e na família de enzimas magnésio-quelatases. Por fim, o composto não apresentou atividade contra os IC testados.
CONCLUSÃO: Além da atividade anti-Mycobacterium tuberculosis já conhecida através de resultados publicados, o composto apresenta baixo índice de indução de resistência e ausência de mutações genéticas, sendo até agora considerado seguro para administração. A ausência de atividade contra alguns IC resistentes contribui para entendimento de seu mecanismo de ação e resistência através da mutação já detectada nessas amostras. Palavras-chave: Mycobacterium tuberculosis, derivados pirrólicos, sequenciamento genômico completo, tuberculose resistente, mutagenicidade Agência de fomento:CAPES, FAPESP | |||||