| Congresso Brasileiro de Microbiologia 2023 | Resumo: 907-1 | ||||
Resumo:Os microrganismos Salmonella enteritidis e Salmonella typhimurium são extremamente prejudiciais à saúde humana, sendo as principais causadoras de doenças transmitidas por alimentos, conhecidas por causar Salmonelose. Essas infecções se apresentam como gastroenterites e em casos mais graves causam a doença diarreica febril que pode ser fatal. Para tanto seu controle é de extrema importância, principalmente nas indústrias alimentícias, onde não há tolerância para Salmonella. Com isso, atualmente tem se buscado incessantemente estratégias que permitam a detecção deste patógeno de maneira mais rápida e assertiva. Sendo assim, o objetivo desse trabalho foi realizar a validação da identificação de Salmonella spp. e os sorovares Enteretidis e Typhimurium em matriz cárnea, pela técnica de Reação em Cadeia da Polimerase em tempo real multiplex e fazendo uso de um processo de enriquecimento mais rápido. Foram utilizadas amostras de carne de frango (25g cada) separadas em sacos estéreis com 225 mL de caldo de enriquecimento e organizadas em 5 grupos: Branco (controle sem bactéria), Escherichia coli (interferente), Salmonella spp., Salmonella enteritidis, Salmonella typhimurium. Para a fortificação de bactéria, foram utilizadas cepas certificadas e adquiridas da ATCC (American Type Culture Colection). Após o inóculo, as amostras foram incubadas a 42°C por um período de 4 horas e 30 minutos. Em seguida, alíquotas de 2 mL do meio enriquecido e fortificado foram encaminhadas para a extração de DNA e subsequente reação de PCR seguindo as instruções do fabricante. Os resultados foram analisados pelo Software do equipamento CFX96 – Bio-Rad e expressos como análise qualitativa, ou seja, presença ou ausência, dos microrganismos alvo. A partir das análises realizadas, verificamos à amplificação do controle interno para todas as amostras, validando o protocolo desde a extração do DNA até a qPCR. Todas as amostras fortificadas foram positivas para Salmonella spp, com exceção da E. coli, mostrando a especificidade dos kits frente a um interferente. Ao avaliarmos as subespécies de Salmonella, observamos que as análises genéticas apresentaram amplificação apenas dentro de cada grupo em específico, S. enteretidis e S. typhimurium. Visto a sensibilidade do método e a assertividade obtida, podemos sugerir que a qPCR detecta os microrganismos com maior precisão e agilidade em comparação às técnicas microbiológicas de isolamento e provas bioquímicas já utilizadas no mercado, com aproximadamente 9 horas já foi possível obter resultados e tipificar os microrganismos presentes. Concluímos que a metodologia de identificação de Salmonella spp. e as subespécies Enteritidis e Typhimurium por qPCR apresentou 100% de assertividade dos resultados e pode ser considerada um método sensível, específico, assertivo e de maior agilidade para a detecção desses microrganismos na indústria. Palavras-chave: DNA, SALMONELLA, MICRORGANISMO, PCR EM TEMPO REAL, SEGURANÇA ALIMENTAR | |||||