| Congresso Brasileiro de Microbiologia 2023 | Resumo: 902-1 | ||||
Resumo:A perda da integridade da pele, como queimaduras e cortes, exige atenção e cuidados imediatos, pois quando não tratada adequadamente, pode gerar complicações locais ou até sistêmicas. Geralmente, estas complicações começam por infecções quando os agentes patológicos penetram nos tecidos dérmicos, causando morte celular, inflamação e sepse. Neste contexto, a Pseudomonas aeruginosa é uma bactéria gram-negativa que apresenta alto risco à saúde humana, tanto pela sua vasta distribuição, quanto pela sua toxicidade. Tendo em vista que os antibióticos perdem a sua eficácia ao longo do tempo, dando espaço para o surgimento de superbactérias, a fagoterapia apresenta-se como uma boa alternativa para o controle do crescimento bacteriano. Entretanto, previamente à sua aplicação in vivo, são necessários testes in vitro, a fim de selecionar bacteriófagos específicos e eficazes, proporcionando um tratamento mais preciso. Neste cenário, a técnica de scratch aplicada a cultura celular epitelial foi empregada para mimetizar um ferimento com maior acuidade, permitindo avaliar a capacidade de regeneração tecidual sob diferentes condições. O presente trabalho visa padronizar um modelo de ferida in vitro em linhagem de fibroblastos murinos L929 ATCC CCL-1™ na presença de P. aeruginosa com o tratamento de bacteriófagos, e avaliar a sua capacidade no controle de crescimento bacteriano em cultura celular. Para tal, os bacteriófagos pertencentes ao banco de isolados do Laboratório de Virologia Aplicada, oriundos de cultivo bacteriano clínico gentilmente cedidos pelo Hospital Universitário da UFSC foram propagados e purificados com clorofórmio e 1-octanol, seguido por uma remoção do solvente orgânico através da centrifugação a vácuo. A titulação bacteriofágica foi determinada pelo ensaio de placas em pequenas gotas e todas apresentaram mais que 1013 UFP/mL. Para determinar o tempo de viabilidade das células L929 na presença de P. aeruginosa, diluições bacterianas em série foram aplicadas sobre o tapete celular em placas de 96 cavidades e mantidas em estufa a 37°C, 5% CO2. Concomitantemente, as diluições bacterianas foram plaqueadas, determinando, assim, que concentrações maiores que 101 UFC/mL destroem o tapete celular 24h após a aplicação bacteriana. Para a avaliação da taxa de migração celular, foi aplicada a técnica do scratch com registros fotográficos a 0h, 24h e 48h, analisados posteriormente pelo programa Fiji conjuntamente com o macro público Wound-healing-size-tool. Resultados preliminares indicam que a presença dos bacteriófagos retarda o processo de cicatrização, porém garante a viabilidade celular até 48h após o experimento, esta não observada nos sistemas sem tratamento. Ensaios prévios de scratch demonstraram a consistência do sistema célula-bactéria-fagos de forma a mimetizar uma ferida epitelial in vitro, onde é avaliada a capacidade de migração celular na presença de bactérias com ou sem o tratamento com bacteriófagos. Planeja-se expandir o trabalho a fim de validar o protocolo estatisticamente e testar novos isolados bacteriofágicos, servindo de base, desta forma, para futuras pesquisas in vivo das interações entre bactérias, bacteriófagos e células. Palavras-chave: cicatrização, fagoterapia, Pseudomonas aeruginosa, regeneração tecidual, scratch Agência de fomento:Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) e Universidade Federal de Santa Catarina (UFSC), SIGPEX UFSC – 201917940 | |||||