| Congresso Brasileiro de Microbiologia 2023 | Resumo: 842-2 | ||||
Resumo:Clostridioides difficile é a causa mais comum de diarreia nosocomial associada a antibióticos e podem apresentar altos níveis de recorrência, morbidade e mortalidade. A patogenicidade está atrelada principalmente à produção de toxinas A (TcdA) e B (TcdB), e em alguns casos, também a uma terceira toxina (Cdt), conhecida como toxina binária. O objetivo deste estudo foi avaliar o perfil de sensibilidade de isolados de C. difficile obtido a partir de amostras de fezes de pacientes sintomáticos internados em diferentes hospitais de Curitiba, entre 2017 e 2019, assim como avaliar o sequence typing (ST) e os genes de resistência e virulência presentes nos mesmos. Os isolados foram obtidos por cultura de fezes de pacientes hospitalizados, com diarreia e em uso de antimicrobianos. A cultura foi realizada em anaerobiose, usando semeadura em meio cefoxitina cicloserina frutose ágar, após esporulação com etanol absoluto. A suscetibilidade a antimicrobianos foi determinada para vancomicina, metronidazol e ciprofloxacina utilizando tiras de gradiente de concentração usando uma metodologia padronizada pelo Clinical and Laboratory Standards Institute. A produção de toxina foi determinada utilizando um teste rápido que detecta toxinas A e B através de ensaio imunoenzimático, realizado com caldo tioglicolato em que os isolados foram incubados em anaerobiose, por 48 horas. Isolados com resultado positive foram consideradas toxigênicos. Além disso, os genes tcdA, tcdB e cdt foram pesquisados por PCR em todas as cepas usando condições descritas previamente. O DNA genômico de 34 cepas selecionadas a partir dos resultados de PCR e dados clínicos foram sequenciadas utilizando Illumina Miseq system (Illumina, San Diego, California, USA), de acordo com as instruções do fabricante. Os genomas foram montados, anotados e analisados utilizando softwares específicos para cada finalidade. Durante o estudo, 80 isolados não duplicados de C. difficile foram obtidos a partir de fezes de 400 pacientes. Entre esses isolados, 62 eram toxigenicos, dos quais 49 possuíam os genes tcdA e tcdB, e os outros 13 possuíam os genes tcdA, tcdB e cdt. Todas os 80 isolados foram sensíveis a metronidazol e vancomicina, porém resistentes a ciprofloxacina. Foram selecionados para sequenciamento 20 isolados com os genes tcdA e tcdB e os 13 isolados com o gene tcdA, tcdB e cdt, além de 1 isolado não toxigênico. A análise do multilocus sequence typing (MLST) dos isolados revelou 12 STs diferentes (ST 2, 3, 5, 42, 43, 55, 114, 122, 149, 463, 573, 709) e um ST desconhecido. Os mais frequentes foram o ST 42 com 23.5% (8/34), ST 5 com 20.6% (7/34), ST 2 com 17.6% (6/34). O ST 3 foi representado por duas cepas uma toxigênica e uma não toxigênica. Foram encontrados genes de toxinas e seus promotores, além de outros fatores de virulência relacionados a adesão e esporulação. Também foram encontrados genes de resistência a vancomicina, embora a resistência não tenha sido observada no teste de sensibilidade. Em conclusão, este estudo descreveu a diversidade e a heterogeneidade genética existentes tanto no ST quanto nos padrões de resistência e virulência de isolados clínicos de C. difficile de uma cidade do sul do Brasil. O conhecimento do genoma de C. difficile e a heterogeneidade das toxinas é crucial para a avaliação dos novos testes diagnósticos, para avaliação epidemiológica e auxílio no estabelecimento de protocolos terapêuticos e de prevenção de infecção. Palavras-chave: Infecção por Clostridioides difficile, diarreia hospitalar, antimicrobianos Agência de fomento:Fundação Araucária-PR/SESA-PR/CNPq/MS-Decit | |||||